Toll样受体在肝衰竭患者及大鼠中的表达及其作用机制的初步研究

• 作 者: 陈煜;张伟帅;冯霞;赵军;丁美;段钟平;
• 机 构: 首都医科大学附属北京佑安医院人工肝中心 100069
• 出 处: 第6届全国疑难及重症肝病大会
• 发表日期: 2011年期

　　目的：Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)是近年来备受关注的一种模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR),通过对病原相关分子模式(pathogenassociated molecular pattems,PAMP)的识别以及刺激信号的级联反应导致细胞因子的产生和协同刺激因子的表达,在天然免疫和获得性免疫中起到了桥梁作用。本论文通过免疫组织化学染色法观察肝衰竭患者及大鼠肝组织中TL,R2、TLR3、TLR4及TLR9的表达情况； 通过免疫组织化学染色法及荧光定量PCR法观察乙肝肝衰竭患者外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cell,PBMC)中TLR2、TLR3、TLR4及TLR9的表达情况,初步探讨TLRs在肝衰竭时的作用,为肝衰竭发病机制的研究提供思路。
　　方法：1.自首都医科大学实验动物中心购买12只雌性wistar大鼠,清洁级,体重150～200g,随机分为3组,每组4只：(1)急性肝衰竭组；(2)慢加急性肝衰竭组； (3)正常对照组。取大鼠肝组织,进行免疫组织化学染色,观察肝衰竭大鼠肝组织中TLR2、TLR3、TLR4及TL,R9的表达。2.收集首都医科大学附属北京佑安医院人工肝中心2009年8月～2009年12月期间确诊为慢性乙型肝炎及正常人肝组织标本各5例及乙肝肝衰竭患者肝组织标本3例,采用免疫组织化学染色法观察各标本TLR2、TLR3、TLR4及TLR9的表达。3.收集首都医科大学附属北京佑安医院人工肝中心2010年1月～2010年6月期间确诊为乙肝肝衰竭、慢性乙型肝炎及正常人全血标本各10例,离心分离血浆,分离PBMC。取PBMC 106个,抽提总RNA,反转录后经荧光定量PCR法检测TLR2、TLR3、TLR4及TLR9 mRNA的表达情况。
　　结果：1.正常大鼠肝组织中TLR2、TLR3、TLR4及TLR9未见表达,急性肝衰竭、慢加急性肝衰竭大鼠肝组织中TLR2及TLR9有表达,而TLR3及TLR4未见表达,TLR2及TLR9的表达多见于炎性细胞中,在肝实质细胞上表达很少。2.正常人及慢性乙型肝炎患者肝组织中TLR2、TLR3、TLR4及TLR9未见表达； 乙肝肝衰竭患者肝组织中TLR2、TLR3及TLR9有表达,而TLR4未见表达,TLR2、TLR3及TLR9的表达多见于炎性细胞中,在肝实质细胞上表达很少。3.乙肝肝衰竭组PBMC中TLR2mRNA表达分别为正常人及慢性乙型肝炎组的6.39倍和4.48倍。乙肝肝衰竭组PBMC中TLR9 mRNA表达分别为正常人及慢性乙型肝炎组的2.61倍和2.58倍。正常人、慢性乙型肝炎、乙肝肝衰竭患者PBMC中TLR3 mRNA、TLR4 mRNA表达的差异无统计学意义。
　　结论：1.TLR2及TLR9在大鼠药物肝衰竭肝组织、人乙肝肝衰竭肝组织炎性细胞及PBMO扣高表达。2.TLR3在人乙肝肝衰竭肝组织炎性细胞中高表达,而在人PBMC中未见高表达且在大鼠药物肝衰竭肝组织中表达阴性。3.TLR4在大鼠药物肝衰竭肝组织、人乙肝肝衰竭肝组织及PBMC中表达阴性。