半巢式RT-Realtime PCR检测马铃薯黑环斑病毒的研究

• 作 者: 耿金培;粟智平;鲁闽;许红岩;陈燕平;
• 机 构: 烟台出人境检验检疫局 山东烟台 264000
• 出 处: 2010年进出境植物检疫学术研讨会
• 发表日期: 2010年期

本研究根据基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)保守序列，设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针，建立了半巢式反转录实时荧光PCR检测PBRSV的新方法。该方法采用E.Z.N.ATM快速提取植物总RNA，并有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术。第二步半巢式反转录实时荧光PCR既是对第一步信号的进一步放大，也是对第一步PCR产物的确认，因此，检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Realtime PCR等方法高。实验结果表明，该方法检测灵敏度可达300fg/μL植物总RNA。