【摘 要】
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采用核酸外切酶酶解DNA产生质量梯度与生物质谱分析相结合，可测定寡核苷酸的序列，同时也为DNA损伤位点的检测提供了方法。通过采用核酸外切酶水解核苷酸之间的磷酸二酯键，即可按照顺序从DNA寡核苷酸链的3端或5端降解单一核苷酸，通过控制酶解时间结合质谱分析实现对DNA损伤位点的精确测定。在此，进一步将酶固定于有机-无机杂化硅胶，设计并合成了基于DNA测序的固定化微酶反应器。首先采用溶胶-凝胶法以四乙氧
【机 构】
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中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室 北京 100085
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采用核酸外切酶酶解DNA产生质量梯度与生物质谱分析相结合，可测定寡核苷酸的序列，同时也为DNA损伤位点的检测提供了方法。通过采用核酸外切酶水解核苷酸之间的磷酸二酯键，即可按照顺序从DNA寡核苷酸链的3端或5端降解单一核苷酸，通过控制酶解时间结合质谱分析实现对DNA损伤位点的精确测定。
在此，进一步将酶固定于有机-无机杂化硅胶，设计并合成了基于DNA测序的固定化微酶反应器。首先采用溶胶-凝胶法以四乙氧基硅烷(TEOS)和3-氨基丙级-三乙氧基硅烷(APTES)为单体，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)为模板，以合适的配比通过水解-缩聚在活化的毛细管中合成有机-无机杂化整体柱;整体柱表面带有氨基基团，以带有双官能团的戊二醛处理整体柱，使一端的醛基与氨基反应，另一端的醛基裸露在整体柱表面形成交联臂，再注入蛇毒磷酸二酯酶(SVP)，使SVP以共价键的形式键合到整体柱上，制成基于DNA测序的微酶反应器。与溶液中的酶解反应相比，固定化酶减少了酶自身降解和金属配合物对DNA测序的影响，同时具有更高的酶/底物比、酶解时间可控，可重复使用等优点。
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