【摘 要】
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本研究以大豆上的16种检疫性真菌、病毒以及转基因成分为研究对象，应用常规PCR、单重实时荧光PCR、多重实时荧光PCR及滚环扩增-基因芯片技术建立相应的检测方法，并构建了检
【出 处】
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中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会
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本研究以大豆上的16种检疫性真菌、病毒以及转基因成分为研究对象，应用常规PCR、单重实时荧光PCR、多重实时荧光PCR及滚环扩增-基因芯片技术建立相应的检测方法，并构建了检疫性真菌分子检测标准物质，最终建立了大豆检疫性真菌、病毒和转基因成分一揽子检测技术体系，据此首次成功搭建了基于单一作物所有检测对象的高通量检测平台，取得如下结果：(1)针对大豆上的6种检疫性真菌和1种危险性真菌，对73种128个供试真菌菌株进行特异性测试，成功建立了大豆疫霉病菌、大豆北方茎溃疡病菌、大豆南方茎溃疡病菌、北美大豆猝死综合症病菌、南美大豆猝死综合症病菌、大豆茎褐腐病菌和大豆拟茎点种子腐烂病菌的单重实时荧光PCR检测方法.(2)针对大豆上的5种检疫性病毒，对11种22个供试病毒菌株特异性测试，成功建立了烟草环斑病毒、番茄环斑病毒、南方菜豆花叶病毒、南芥菜花叶病毒和菜豆荚斑驳病毒的常规PCR和实时荧光单重PCR检测方法.(3)在大豆检疫性真菌单重实时荧光检测方法基础上，首次成功建立了大豆疫霉病菌、大豆北方茎溃疡病菌、大豆南方茎溃疡病菌和大豆拟茎点种子腐烂病菌的4重实时荧光PCR检测方法，实现一次PCR可同时检测四种目标真菌，检测灵敏度均达到100fg.(4)综合利用滚环扩增和基因芯片检测技术首次分别建立了大豆疫霉病菌、大豆北方茎溃疡病菌、大豆南方茎溃疡病菌、北美大豆猝死综合症病菌、南美大豆猝死综合症病菌和大豆茎褐腐病菌等6种真菌同时检测方法；烟草环斑病毒、番茄环斑病毒、南方菜豆花叶病毒、南芥菜花叶病毒和菜豆荚斑驳病毒等5种检疫性病毒同时检测方法；并针对Lectin基因、35S启动子、Nos终止子、CP4EPSPS基因及Roundup Ready(@)品系等5种转基因结构基因和品系特异性基因的同时检测方法；以及针对以上所有检疫性真菌、病毒和转基因成分共16个目标同时检测的高通量方法.所建立检测方法仅需要8小时，大幅度缩短了检测时间，提高了检测效率.
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