【摘 要】
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为探索在体外获得人多巴胺能神经元的有效途径,以过表达Nurrl基因神经前体细胞为模型,研究SHH和FGF8对神经前体细胞向多巴胺能神经元分化的影响。实验采用RT-PCR方法从人胎儿
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为探索在体外获得人多巴胺能神经元的有效途径,以过表达Nurrl基因神经前体细胞为模型,研究SHH和FGF8对神经前体细胞向多巴胺能神经元分化的影响。实验采用RT-PCR方法从人胎儿脑中获取Nurrl cDNA,测序鉴定后,重组携带Nurrl基因的逆转录病毒载体pLEGFP—Nl-Nurrl；通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系,用病毒上清感染NIH 3T3细胞系以检测病毒滴度。鉴定Nurrl基因能在人胚胎神经前体细胞中过表达后,应用免疫荧光方法研究SHH和FGF8对转基因神经前体细胞向多巴胺能神经元分化的影响。
结果发现,RT—PCR扩增得到人Nurrl cDNA片段,序列与Genebank登录的序列一致；将Nurrl基因亚克隆至逆转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLEGFP—Nl-Nurrl,病毒上清滴度为2×105CFU/ml。Nurrl基因能够在神经前体细胞过表达,在SHH和FGF8作用下,可明显提高分化体系中神经元比例和多巴胺能神经元在神经元中的比例(P<0.05)。结果表明本实验获得人Nurrl基因cDNA序列,过表达Nurrl基因的人神经前体细胞在SHH和FGF8作用下可较高效地分化为多巴胺能神经元。
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