【摘 要】
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本试验根据GeneBank已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计一对IBVS1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5端不含信号肽序列,3端添加了终止
【机 构】
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河南科技大学动物科技学院 河南洛阳 471003
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛
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本试验根据GeneBank已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计一对IBVS1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5端不含信号肽序列,3端添加了终止密码子的IBV S1基因表达片段。用限制性内切酶SnaB Ⅰ和Not Ⅰ将S1基因和裁体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl Ⅱ将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His+Muts。将重组菌株在1％的甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析,结果表明,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76KD,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5％。本研究表达的IBV S1蛋白可作为制备IB诊断抗原、基因工程疫苗的基础材料,对IB的诊断防治有重要的学术价值和应用价值。
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