【摘 要】
：
目的 研究一种高效表达铜绿假单胞菌海藻酸裂解酶(algL)的方法,大量获得重组蛋白后并测定其活力.方法 根据GenBank上发表的algl基因序列设计引物,PCR扩增后得algl基因片
【出 处】
：
第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
论文部分内容阅读
目的 研究一种高效表达铜绿假单胞菌海藻酸裂解酶(algL)的方法,大量获得重组蛋白后并测定其活力.方法 根据GenBank上发表的algl基因序列设计引物,PCR扩增后得algl基因片段,对目的基因片段进行密码子优化得到algL-O,将其导入克隆载体pUC57,构建重组质粒pUC57-algL-O,再利用双酶切后获得目的基因片段algL-O,通过酶切及连接反应将algL克隆入原核表达载体pET30a(+),构建原核表达质粒pET30a(+)-algL-O.将鉴定正确的阳性重组质粒pET30a(+)-algL-O转化BL21(DE3),IPTG诱导重组质粒的表达,表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blot分别测定其大小和特异性,用镍柱亲和层析法纯化融合蛋白,用BSA标准曲线测定纯化蛋白的浓度并进行酶活力的检测.结果 成功克隆algL基因并获得高效表达.SDS-PAGE分析可见39kD的目的蛋白表达条带.Western blot结果显示在相对分子量约为39.2 kD处呈现特异性阳性条带.在550 nm下测定吸光度,计算出酶活力约为460 U/ml.结论 成功高效表达出algL-O蛋白,且其酶的活力表现良好.
其他文献
论文重点研究了塔里木轮古稠油常压渣油中的金属分布及其化合物的存在形态，对渣油中金属卟啉进行了分离、提纯，并用紫外可见吸收光谱进行了鉴定，以及分散性催化剂存在下临氢高压
患者女,44岁面部红斑伴瘙痒2月余,加重1周.有糖尿病病史7年.皮肤科情况：额部及面颊部潮红肿胀,片状红斑,边界清晰,其上散在黄色结痂.实验室检查：真菌镜检阳性,并做培养分离
氮氧化物(NOx)是造成酸雨、雾霾等环境污染现象的大气主要污染物，对人类的生活和生产造成危害。燃煤电厂烟气要实现低成本脱硝，最简便的方法是利用烟气中剩余的O2，在催化剂的作
本研究对从紫草种子RadixLethospermiSeed(RLS)中提取超氧化物歧化酶(SOD)的条件进行优化。RLS粗酶液中SOD的比活较低，经硫酸铵沉淀，各种色谱分离技术及固定化金属亲和层析纯化
植物组织培养中，蔗糖作为标准碳源与培养物的生长速度和生长量密切相关，是影响植物组织培养成功与否的关键因素。植物组织培养是在无菌，半封闭环境下进行的，而传统的蔗糖测定方法
本文以工业鼓泡塔反应器工艺特点为基础，建立了气相活塞流+液相轴向扩散模型描述鼓泡塔反应器的气液相逆流流动，并利用该模型结合现有的水合物生成动力学研究成果对设备参数为H
目的 评价专项整治活动对我院临床菌药物合理应用及减缓细菌耐药性的效果.方法 按抗菌药物专项整治前后三年进行分组,比较两组抗菌药物临床应用相关指标及细菌耐药性等数
目前，我国成品汽油当中含有大量的烯烃，使汽油在燃烧过程释放大量的NOx和其它的污染物，对环境造成很大影响。我国炼油二次加工以催化裂化为主，高达80％的汽油来自催化裂化，所以降低
本文研究了系列含氟γ-内酯的合成,如多环γ-内酯、多氟烷基γ-内酯和α,α-二氟-γ-丁内酯.并对多氟烷基碘代烷和降冰片烯及其羧酸衍生物在连二亚硫酸钠引发下的氟烷基化反