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目的：研究和探讨视神经(OpticNerve,ON)损伤后的自然修复再生和脯源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor)及睫状神经营养因子(Ciliary NeurotrophicFactor,CNTF)互补辅助再生的GAP-43mRNA原位杂交组织化学和分子神经生物学变化特征,寻找ON有效再生的新途径。
材料和方法：本课题用纯种猫作为实验对象,动物随机分为四组;
1、正常对照组(G1),2、单纯球后ON1/2切断组(G2),3、ON1/2切断并定时玻璃体内注射生理盐水对照组(G3),4、ON1/2切断并定时玻璃体内注射BDNF和CNTF复合因子辅助再生组(G4)。动物模型制做方法为以眶外侧入路方法手术开眶,暴露眼球后ON,在眼球后5毫米处准确行ON的1/2切断术。术后四组动物在相同视环境中饲养4～8个月,G4组在术后即日注射BDNF和CNTF复合液(10ng),以后每周注射BDNF和CNTF复合液2次。在ON损伤后第4个月和第8个月经PVEP检测后将动物处死行外侧膝状体的GAP-43mRNA原位杂交组织化学检测。
结果：在ON损伤4个月时,正常对照组与G2组、G3和G4组的LGN的损伤眼相应输入层GAP43mRNA原位杂交阳性信号神经元的细胞数密度和其积分光密度比较为：G1/G2(P<0.001);G1/G3(P<0.001;P<0.01);G1/G4(P<0.01;P<0.05);G4/G3(P<0.05);G4/G2(P<0.01)。统计结果显示正常对照组与G4组比较GAP-43mRNA表达水平具有显著差异。正常对照组与G2组和G3组比较都具有非常显著差异性。G4组与单纯G2组和G3组比较则也具有显著差异性。在ON损伤8个月时,正常对照组与单纯G2组、G3组和G4组的LGN的损伤眼相应输入层GAP43mRNA原位杂交阳性信号神经元的细胞数密度和积分光密度比较为：N/ON1/2I(P<0.001)：N/Onl/2I+PS(P<0.001)N/ON1/2I+BF(P<0.05);ON1/2I+BF/ON1/2I+PS(P<0.05);ON1/2I+BF/ON1/2I(P<0.01)。
统计结果显示正常对照组与ON1/2切断并定时玻璃体内注射BDNF和CNTF复合因子辅助再生组比较具有显著差异。而正常对照组与单纯ON1/2切断组和ON1/2切断并定时玻璃体内注射生理盐水对照组比较则都具有非常显著差异性(P<0.001)。ON1/2切断并定时玻璃体内注射BDNF和CNTF复合因子辅助再生组与单纯ON1/2切断组和ON1,2切断并定时玻璃体内注射生理盐水对照组比较则也具有显著差异性(P<0.01)。
结论：1、视神经1/2损伤后可以施加条件因素辅助再生,BDNF和CNTF对促进视神经损伤后的再生有调节局部微环境和互补促生长作用。2、原位杂交组织化学实验证实了视神经1,2损伤后的复合神经营养因子辅助视神经再生具有显著的拮抗损伤效应,这也进一步证实了由动态PVEP检测所得结果。在外侧膝状体(Lateral Genicu-late Nucleus,LGN)A,A1和C层据均存在GAP43mRNA原位杂交阳性信号,且损伤眼相应输入层出现GAP43mRNA表达的减弱和减少。ON1/2切断并定时玻璃体内注射BDNF和CNTF复合因子辅助再生组在L,GN损伤眼相应输入层的GAP43mRNA表达的阳性信号与单纯ON1/2切断组和ON1,2切断并定时玻璃体内注射生理盐水对照组比较显著增多增强,表明BDNF和CNTF复合因子有拮抗损伤和辅助ON损伤后的修复和再生作用。另外,ON1/2切断损伤后再生能力强于ON完全切断伤是否与另1/2完整部分ON的RGCs轴突的旁分泌及自目标逆向运输的促生长活性因子有关还有待于进一步研究。