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目的 本研究拟评估Y-27632在人胚胎干细胞建系效率的作用,分析Y-27632对人胚胎干细胞的不同建系方法的影响.方法 收集2010年4月至201 1年4月在中山大学附属第一医院生殖医学中心IVF-ET周期中第三天废弃胚胎,以3种不同方法进行人胚胎干细胞建系,(1)经ROCK抑制剂(Y-27632)干预培养而来的囊胚的人胚胎干细胞建系效率;(2)ROCK抑制剂(Y-27632)对内细胞团(PGD废弃囊胚或者废弃胚胎培养形成囊胚切割后的ICM)的人胚胎干细胞建系效率的影响;(3)ROCK抑制剂(Y-27632)对废弃胚胎分离的单个卵裂球的人胚胎干细胞建系效率的影响.结果 (1)第一部分中收集废弃胚胎随机进入研究组和对照组,分别培养获得61个和64个囊胚,分别建立了5株和7株人胚胎干细胞系,建系率分别为8.2%和10.9%,组间差异不具有统计学显著性;(2)第二部分获得78个囊胚,随机进入研究组和对照组,两组分别建立了7株和8株人胚胎干细胞系,建系率分别为17.9%和20.5%,组间差异不具有统计学显著性;(3)第三部分收集了275个废弃胚胎,由此分离并进入研究的卵裂球1176个,研究组588个,对照组588个,建系过程类似于ICM切割的建系过程,研究组贴壁数为296个(49.7%),出现生长物(outgrowth)个数为31个(5.3%),而生长物中央出现细胞致密、未分化的拱圆形团块(Dome-Like)的有5个(0.9%),最后形成胚胎干细胞3株(0.5%);对照组贴壁数为220个(37.4%),出现生长物(outgrow)个数为16个(2.7%),而生长物中央出现细胞致密、未分化的拱圆形团块(Dome-Like)的有2个(0.3%),最后形成胚胎干细胞0株(0%).组间比较发现研究组的贴壁率较对照组高,差异具有统计学显著性(p<0.001),研究组出现生长物的比例较对照组高,差异具有统计学显著性(p=0.026),研究组出现D-L结构的比例与对照组比较无明显统计学差异(p=0.255),研究组建立3株人胚胎干细胞,对照组未能建立人胚胎干细胞株,但是两组间比较的差异无统计学显著性(p=0.083).结论 1.第3天废弃胚胎经ROCK抑制剂Y-27632干预培养后并未能增加人胚胎干细胞的建系效率;2.囊胚经切割后的ICM在含有ROCK抑制剂Y-27632的培养基中未能增加人胚胎干细胞的建系效率;3.废弃胚胎来源的卵裂球在含有ROCK抑制剂Y-27632的培养体系中可建立人胚胎干细胞系,其机理可能因为Y-27632可以增加卵裂球与饲养层间的粘附性.