一步法RT-PCR扩增PRSV海南分离物全长基因组cDNA

来源 :2011年度中国热带作物学会遗传育种专业委员会年会暨学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangyan215076379
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  为了研究番木瓜环斑病病毒海南分离物(PRSV HN-2)的全部核苷酸序列,应用植物总RNA提取试剂盒获得了高纯度的总RNA,使用Oligo dT-Adaptor和Random9引物合成了cDNA的第一链,基于已报道的PRSV全长基因组序列,设计合成了一对引物,一步法RT-PCR扩增出PRSV海南分离物全长基因组cDNA。为了验证获得的全长基因组cDNA的正确性,以扩增出的全长cDNA为模板,将PRSV全长基因组分成A和B两个大片段进行扩增,并应用T载体进行了克隆和测序,测序结果显示,其与国内外报道的PRSV各分离物全长核苷酸序列的相似性很高,表明本文建立的一步法RT-PCR扩增尸脑PRSV全长基因组cDNA的方法正确、可行。
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