【摘 要】
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根据GenBank已登录的猪附红细胞体(M.suis)推测的功能性蛋白基因ORF2序列设计引物和TaqMan荧光探针,以定量的10倍系列稀释含M.suis部分ORF2基因的T载体重组质粒(pGEX-T/M.sui
【机 构】
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河南省动物疫病预防控制中心,郑州,450008
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
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根据GenBank已登录的猪附红细胞体(M.suis)推测的功能性蛋白基因ORF2序列设计引物和TaqMan荧光探针,以定量的10倍系列稀释含M.suis部分ORF2基因的T载体重组质粒(pGEX-T/M.suis)为标准品,进行荧光定量PCR扩增并制作了标准曲线,经对荧光定量PCR的反应条件进行优化,建立了M.suis的TaqMan荧光定量PCR测方法(Taqman FQ-PCR)；对所建立的FQ-PCR检测方法进行了敏感性、特异性和重复性实验,并对疑似M.suis感染临床抗凝全血样品进行了检测应用。结果显示:标准曲线的曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,相关系数为0.998；所建立的FQ-PCR方法检测灵敏度可达10个拷贝/μL,比对照常规PCR灵敏度高100倍；FQ-PCR方法特异性高,对pGEX-T/M.suis重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对8个对照细菌、病毒和寄生虫DNA扩增曲线均呈现阴性反应；对不同浓度的pGEX-T/M.suis重组质粒分别重复扩增2次,重复结果良好；用该方法对24份临床疑似M.suis感染样品进行了应用检测,结果有20份样品为阳性,阳性检出率高于常规PCR方法。
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