【摘 要】
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为获得并研究鸭干扰素-α(DuIFN-α)的生物学功能,将鸭干扰素-α(DuIFN-α)成熟蛋白基因与原核表达载体pET32a+连接后转化到BL21(DE3)获得工程菌BL21(DE3)/pET32a+-DuIFN-α,
【机 构】
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四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心,四川,雅安,625000
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
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为获得并研究鸭干扰素-α(DuIFN-α)的生物学功能,将鸭干扰素-α(DuIFN-α)成熟蛋白基因与原核表达载体pET32a+连接后转化到BL21(DE3)获得工程菌BL21(DE3)/pET32a+-DuIFN-α,对其诱导表达条件、表达产物的纯化和复性关键技术及其抗水疱性口炎病毒(VSV)活性、保存温度对工程菌稳定性的影响进行了研究。结果表明:BL21(DE3)/pET32a++DuIFN-α经0.4mmol/LIPTG诱导获得高效表达,表达的重组蛋白分子量大小约37KD,以包涵体形式存在；重组蛋白经镍金属螯合介质(Ni-MIAC)进行纯化和复性后获得理想效果,其抗VSV活性的比活力达到12800U/mg；15U/ml的鸭干扰素-α对鸭瘟强毒可以表现出抑制作用；工程菌种的表达能力在4℃和-20℃分别保存40d和90d即逐渐丧失,-70℃保存1年仍能够获得稳定表达。本复性方法成功的实现了鸭干扰素-α的柱上层析复性,表现出了对VSV和DPV强毒的抗病毒活性,为鸭干扰素-α的临床应用提供了试验数据。
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