【摘 要】
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目的：探讨IL-27对人外周血单个核细胞来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)分化成熟及其作用机制的影响.方法：从正常健康人外周血中分离出单个核细胞,将其用GM-CSF,IL-4体外培养7d,并于培养第5天加入不同刺激因子分为四组：Negative组、TNF-α组(TNF-α：20ng/ml)、IL-27组(IL-27： 20ng/ml)、TNF-α +IL-27组(即双细胞因子组
【机 构】
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河北医科大学第四医院科研中心,石家庄050011
【出 处】
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2012年全国肿瘤分子标志学术大会与国际肿瘤转化医学论坛暨第七届中国中青年肿瘤专家论坛
论文部分内容阅读
目的：探讨IL-27对人外周血单个核细胞来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)分化成熟及其作用机制的影响.方法：从正常健康人外周血中分离出单个核细胞,将其用GM-CSF,IL-4体外培养7d,并于培养第5天加入不同刺激因子分为四组：Negative组、TNF-α组(TNF-α：20ng/ml)、IL-27组(IL-27： 20ng/ml)、TNF-α +IL-27组(即双细胞因子组,TNF-α：10ng/ml +IL-27：10ng/m1).用倒置显微镜观察培养过程中DC的形态学变化,用流式细胞术检测DC表面共刺激分子CDla、CD83和CD80、CD86的双阳性率,以及表面粘附分子ICAM-1的表达水平,用MTS方法检测DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力,用ELISA的方法检测DC培养上清中细胞因子IL-12、IFN-γ的分泌水平,用Western-blot法检测DC信号通路蛋白MAPKp38、P-STAT1和P-STAT3的含量.结果：光镜下,IL-27组和TNF-α +IL-27组诱导至第7天DC呈现典型的成熟形态学特征；其DC表面CDl a和CD83、CD80和CD86的双阳性率显著增高,与TNF-α组相比具有统计学意义(P＜0.05),粘附分子ICAM-1的表达水平与Negative组相比也明显升高；随DC与T细胞比例增加,其刺激T细胞增殖的能力增强.当DC与T细胞比例在1∶10时,TNF-α +IL-27组的刺激作用显著高于TNF-α组和IL-27组,结果具有统计学意义(P＜0.05).TNF-α组、IL-27组和TNF-α +IL-27组DC培养上清中细胞因子IL-12、IFN-γ的分泌水平较Negative组明显上调,其中TNF-α+IL-27组的分泌水平较TNF-α组仍具有统计学意义.细胞内信号通路蛋白MAPKp38、P-STAT1和P-STAT3的水平较Negative组明显上调,以TNF-α +IL-27组更为明显.结论：体外实验中,细胞因子IL-27可以直接或者协同TNF-α诱导DC成熟,刺激T淋巴细胞增殖功能增强,诱导产生更多的IL-12和IFN-γ,其机制可能通过活化MAPKp38、P-STAT1、P-STAT3等信号通路.
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