论文部分内容阅读
目的：研制牛口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白抗体胶体金免疫层析试纸条，用于FMDV感染动物检测、诊断。
方法：利用基因工程表达FMDV非结构蛋白VPg1-2，标记胶体金颗粒。采用双抗原夹心法原理建立胶体金免疫层析试纸条检测方法。通过方阵试验确定VPg1-2抗原和Au-VPg1-2抗原以及单克隆抗体的最适T作浓度，组装试纸条，对人工感染FMDV牛体内FMDV非结构蛋白抗体消长情况进行测定，对94份背景清楚牛血清样品和189份临床样品进行检测，并与FMDV非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA方法进行比较。
结论：选择VPg1-2浓度为1.0mg/ml、Au-VPg1-2稀释5倍、VPg1-2单克隆抗体浓度为1.0mg/ml进行试纸条组装。人工感染5头牛全部出现FMDV非结构蛋白抗体阳性反应。最早检出时间为感染后20天，感染后30～60天抗体达到最高峰，抗体阳性反应持续最长时间为感染后540天以上。对背景清楚血清样品检测的敏感性为98％，特异性为100％，与FMDV非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA方法检测结果的符合率为98.9％。对189份临床样品检测的特异性为100％，敏感性为97.1％，与FMDV非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA方法检测结果的符合率为99.5％。