【摘 要】
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目的：检测端粒结合蛋白CTC1的表达与人类恶性黑色素瘤细胞放射敏感性之间的关系并探讨其潜在的作用机制.方法：以人恶性黑色素细胞株MDA-MB-435为研究对象,采用X射线分次外照射模式,构建人放射敏感/放射抗拒黑色素瘤细胞模型——MDA-MB-435/MDA-MB-435R.克隆形成实验比较两种细胞的放射敏感性差异.Realtime PCR和western blot分别检测两种细胞中CTC1的mR
【机 构】
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湖北省肿瘤医学临床研究中心,肿瘤生物学行为湖北省重点实验室,武汉大学中南医院 湖北省肿瘤医学临床研
【出 处】
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第九届泛珠江区域放射肿瘤学学术大会暨肿瘤放射治疗多中心协作研讨会、重庆市医学会放射肿瘤治疗学专业委员会2014年会
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目的：检测端粒结合蛋白CTC1的表达与人类恶性黑色素瘤细胞放射敏感性之间的关系并探讨其潜在的作用机制.方法：以人恶性黑色素细胞株MDA-MB-435为研究对象,采用X射线分次外照射模式,构建人放射敏感/放射抗拒黑色素瘤细胞模型——MDA-MB-435/MDA-MB-435R.克隆形成实验比较两种细胞的放射敏感性差异.Realtime PCR和western blot分别检测两种细胞中CTC1的mRNA及蛋白水平的变化.采用免疫荧光检测两种细胞分别经X射线(6MV,6Gy)照射12h(单纯照射组)及siCTC1干扰48 h联合X射线照射12 h(射线联合干扰组)引起的DNA损伤修复反应的差异.利用Realtime PCR分别比较两种细胞相对端粒长度的差异.通过流式细胞术比较两种细胞单纯照射组及射线联合干扰组中细胞凋亡率的改变.结果：1.MDA-MB-435R细胞株较MDA-MB-435细胞株具有明显的放射抗性,其D0值分别为(3.266±0.072)和(2.093±0.131)(P＜0.01)；Dq值分别为(2.379±0.108)和(2.088±0.046) (P＞O.05)；SF2值分别为(0.701±0.016)和(0.574±0.018) (P＜0.01). 2.MDA-MB-435R细胞株中CTC1的mRNA水平和蛋白水平分别是MDA-MB-435细胞株的1.6倍和1.25倍(P＜0.05).3.在MDA-MB-435细胞株中,γH2AX阳性细胞的百分比在单纯照射组和射线联合干扰组中分别为(73.14±4.74)％和(92.35±3.22)％ (P＜0.05)；平均每个细胞中γH2AX的数量分别为(2.7±0.5)个和(5.8±0.3)个(P＜0.0l).在MDA-MB-435R细胞株中,γH2AX阳性细胞的百分比在单纯照射组和射线联合干扰组中分别为(25.36±3.92)％和(56.72±5.3)％ (P＜0.01)；平均每个细胞中γH2AX的数量分别为(1.3±0.2)个和(2.8±0.3)个(P＜0.01).4.MDA-MB-435R细胞株中相对端粒长度是MDA-MB-435细胞株的2.1倍(P＜0.01).5.在MDA-MB-435细胞株中,单纯照射组和射线联合干扰组的细胞凋亡率分别为(26.84±3.91)％和(49.32±5.67)％ (P＜0.01)；在MDA-MB-435R细胞株中,单纯照射组和射线联合干扰组的细胞凋亡率分别为(21.26±6.75)％和(46.21±4.24)％ (P＜0.01).结论：CTC1蛋白能够通过促进DNA损伤修复、抑制端粒的缩短和细胞凋亡来增加人恶性黑色素瘤细胞的放射抗性.CTC1蛋白可能成为人类恶性黑色素瘤治疗的一个新的有效靶点.
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