【摘 要】
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小分子诱导胚胎干细胞(ESCs)定向分化为功能性细胞是目前的研究热点.在ESCs定向分化的体外模型中,三维球状结构的拟胚体(EBs)是常用的一种自发分化途径.传统EBs形成方法
【出 处】
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第九届全国微全分析系统学术会议、第四届全国微纳尺度生物分离分析学术会议、2014国际微流控芯片与微纳尺度生物分离分析学术
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小分子诱导胚胎干细胞(ESCs)定向分化为功能性细胞是目前的研究热点.在ESCs定向分化的体外模型中,三维球状结构的拟胚体(EBs)是常用的一种自发分化途径.传统EBs形成方法包括悬浮法、悬滴法、微阵列法等,但分别存在EBs大小不均一、操作通量低、回收困难等缺陷[1].针对EBs制备需要供给足够养分的需求,本课题组提出基于微针阵列的高通量制备微升级液滴的新方法,实现了EBs的快速、高通量制备.微升级液滴生成为其他三维多细胞球体的制备提供新方法,自动化操控系统为EBs规模化制备提供可行性.用于高通量单分散EBs制备的微流控系统主要包括微流控芯片、三维移动平台和微阀控制箱等组件,自动化控制由计算机Labview软件完成.微流控芯片按照96孔板的尺寸设计成二叉树结构,通过电磁阀的自动切换控制液滴生成的频率和同步性.微针由商品化针头改造而成,成本低,可选择范围宽且变异系数小.选择不同尺寸的微针,可得到的液滴大小范围是4-35 μL.通过控制液滴的大小和ESCs密度,可快速、自动化制备多种尺寸的EBs.有研究表明,EBs的尺寸与分化方向密切相关[2].利用形态学和分子生物学手段,考察该方法对EBs活性和三胚层基因表达的影响,进而评价不同尺寸EBs对促心肌分化方向的影响.
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