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枯萎病是作物和蔬菜生产中的毁灭性病害,目前生产上虽然使用大量杀菌剂进行防治,但是结果都不理想.在枯萎病的防治方面,鉴于缺乏有效的化学药剂,也没有适宜本地栽培的有效抗病品种,人们希望在生物防治上找到突破口.孙正祥等分离到对香蕉枯萎病病原菌具有很强抑制作用的枯草芽胞杆菌[2].曹理想等[3]从香蕉组织内分离的几株内生菌对该病有不同程度的抑制作用,但抑制效果不理想.据报道,橄榄产色链霉菌(Streptomyees olivochromogenes)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)[8]和非致病性镰刀菌[9]等对不同作物的枯萎病菌都具有明显的抑制作用.但是,由于难以区分目标微生物和根际土壤内的其它相似微生物,因而很难对生防菌的生防机理进行详细地分析和研究[10].绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)标记系统具有标记基因小(约800bp),直接肉眼检测荧光、对细胞安全、稳定等优点[11,12],已被成功用于微生物定殖[13]、对宿主组织侵染14]、微生物动态监测[15]等研究.王浩等[16]用gfp基因标记法研究大豆根瘤菌在大豆根部定殖结瘤情况,发现gfp标记菌CCBAU01287 (G)可用于实时监测根瘤菌在大豆根部的早期定殖情况和定殖密度的测定.本文拟用绿色荧光蛋白报告(gfp)基因标记枯萎病生防菌JK-2,并采用抑菌率法研究其标记前后对不同植物枯萎病原菌的抑菌作用.采用gfp基因标记了枯萎病生防菌——短短芽胞杆菌Brevibacillus brevis菌株JK-2.标记后的菌株在选择性培养基上的菌落为圆形,同原始菌株相同；在立体荧光显微镜下观察,整个菌落发出绿色荧光,其菌体形状同原始菌株一样,均为短杆状,发绿色荧光.生防菌JK-2：pCM20的生长起始时期为培养的0～6h,菌株生长起始期生长缓慢；培养6h后,标记菌株进入对数生长时期,菌株生长迅速；至10h后,开始进入稳定生长时期.在无选择压力条件下,对JK-2：pCM20在指数期以1％(体积分数)接种量连续转接15次,JK-2：pCM20的绿色荧光蛋白标记丢失率仅为11.7％.JK-2：pCM20对不同寄主植株枯萎病原菌具有很强的抑菌能力,平均抑菌率为95.38％,与野生型菌株JK-2的抑菌率96.16％相差不大.说明gfp基因的标记并未影响枯萎病生防菌JK-2：pCM20对不同植物枯萎病原菌的抑菌能力.