【摘 要】
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目的：构建变链菌自溶素真核表达质粒pcDNA3.1 (+)-tPA/GbpC/IRES/eGFP,为进一步研究变链菌葡聚糖结合蛋白C (GbpC)的功能奠定基础.方法：(1)通过对变链菌UA159生物信息学分
【出 处】
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2013年全国第四次牙体牙髓病学临床研讨会
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目的：构建变链菌自溶素真核表达质粒pcDNA3.1 (+)-tPA/GbpC/IRES/eGFP,为进一步研究变链菌葡聚糖结合蛋白C (GbpC)的功能奠定基础.方法：(1)通过对变链菌UA159生物信息学分析,确定葡聚糖结合蛋白CGbpC的基因序列；(2) PCR扩增GbpC及IRES/eGFP；(3) NheⅠ/XhoⅠ酶切pcDNA3.1(+),并连接tPA；(4)选择PmeⅠ/XbaⅠ内切酶,将IRES/eGFP片段插入到pcDNA3.1(+)-tPA,T4连接酶构建pcDNA3.1 (+)-tPA/IRES/eGFP骨架；(5)将真核载体骨架pcDNA3.1 (+)-tPA/IRES/eGFP和GbpC基因片段分别用NotⅡ /Xho Ⅰ双酶切,连接获取重组质粒pcDNA3.1 (+)-tPA/AtlA/IRES/eGFP,并对其进行PCR、酶切和测序鉴定.
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