一种快速鉴定耐药结核分枝杆菌的方法

• 作 者: 李淑芬[1]孙伊索[2]周琳[3]周林[1]赵存友[1]薛红[2]
• 机 构: 南方医科大学基础医学科学学院医学遗传学教研室 广州
• 出 处: 广东省遗传学会第九届代表大会暨学术研讨会
• 发表日期: 2014年期

　　结核分枝杆菌耐药突变的快速诊断对结核病的早期有效治疗和控制至关重要,然而传统的结核杆菌药敏试验需要长达几周的时间,所以我们需要新的方法减少诊断时间,缩小传播的范围.本研究将基于单碱基延伸的基因分型方法应用于结核分枝杆菌耐药性基因突变的快速检测中,我们主要针对六个基因的耐药突变,这些基因有：rpoB, rpsL, rrs,embB, katG,和inhA.此方法用耐药性突变基因的PCR扩增产物为模板,进行单碱基延伸反应,将荧光标记的核苷酸连接到引物上,然后测定荧光偏振值(FP),根据FP值进行基因型判定,确定是否为耐药性突变.我们用这种基因分型方法总共检测了121个临床氮样,以测序法对试验结果进行评估,测序样品为包含有前人报道过的耐药性突变位点的PCR扩增产物.对比由细菌药敏试验得到的基因分型结果,评估单碱基延伸试验的灵敏度、特异性和准确性这三项指标,对应于不同的抗结核药物的基因突变检测结果,这三项指标的评估值分别为：耐利福平的ropB基因：83.9％,95.5％,和92.4％；耐链霉素的rpsL和rrs基因：67.3％,97.1％,和84.3％；耐乙胺丁醇的embB基因：60.0％,96.0％,和91.4％；耐异烟肼的inhA和katG基因：68.4％,94.9％,和86.3％；至少为耐异烟肼和利福平两种抗结核药物的多重耐药突变的为：74.1％,98.9％,和93.2％.总而言之,用基于单碱基延伸的基因分型技术检查临床氮样以确定是否为耐药结核是一种快速且高效的耐药结核分子诊断方法.