论文部分内容阅读
目的：小电导钙激活钾通道(small Conductance Calcium Activated Potassium Channels type Ⅱ,SK2)是近年来在心房肌细胞膜上表达的离子通道,具有心房特异性,在心房颤动等房性心律失常中起重要作用。本研究旨在采用Overlapping PCR(重叠PCR)法进行SK2通道Flag和GFP融合表达质粒的构建,为下一步胞外运用Flag抗体进行SK2通道的转运调控研究奠定基础。方法：在既往克隆的人SK2通道基因的表达质粒pIRES-SK2的基础上,采用重叠PCR法构建Flag和GFP双标签标记的表达质粒pEGFP-N3-Flag-SK2(简写为Flag-SK2-GFP)。结果：构建的表达质粒Flag标签插入SK2通道的S1-S2胞外环区域,GFP标签连接SK2通道胞内的C末端,通过酶切、测序等证实质粒构建成功。结论：成功构建人心房肌SK2通道基因表达质粒Flag-SK2-GFP,为下一步研究SK2通道转运过程及调控机制奠定了基础,同时重叠PCR能够很好的用于长片段基因扩增和插入片段的实验。