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原位杂交已广泛应用于组织和细胞中DNA和RNA的检测,但是且存在着许多不确定因素,例如组织的保存和固定条件,探针的类型和杂交条件;信号放大的敏感性等将直接影响到ISH的成功率(或杂交信号检测率),尤其是当应用cRNA探针检测组织细胞中的mRNA时,稳定性更差.本研究应用ISH方法,二种新近发现的IAP家属新成员Survivin和Livin基因cRNA探针,检测5例新鲜乳腺癌组织冰冻切片,观察固定液pH值和固定时间对ISH结果的影响.结果用碱性4％多聚甲醛固定40min杂交信号最强,酸性和中性4﹪多聚甲醛固定20min无杂交信号、40min可见Survivin有弱的杂交信号.结论:新鲜组织冰冻切片后用pH9-104﹪多聚甲醛固定40min效果最佳,阳性信号最强.