【摘 要】
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目的 创伤弧菌溶细胞素(VVC)是创伤弧菌重要的毒力.该菌感染起病急,机体抗感染以天然免疫应答为主.为深入了解VVC对原代巨噬细胞的影响,本文以重组表达的VVC (rVVC)体外作用小鼠原代巨噬细胞为模型,研究VVC对诱导TNF-α表达和细胞氧化应激的作用和机制.方法 1)rVVC经多粘菌素B(PMB)脱内毒素处理作用小鼠骨髓诱导巨噬细胞(BMMΦ)、脾脏和肝脏单核细胞悬液,流式细胞术分析rVVC
【机 构】
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温州医科大学检验医学院 温州 325035 复旦大学附属金山医院检验科 上海 200540
【出 处】
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第三届临床微生物学与感染病学国际论坛暨全国微生物与人体健康学术会议
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目的 创伤弧菌溶细胞素(VVC)是创伤弧菌重要的毒力.该菌感染起病急,机体抗感染以天然免疫应答为主.为深入了解VVC对原代巨噬细胞的影响,本文以重组表达的VVC (rVVC)体外作用小鼠原代巨噬细胞为模型,研究VVC对诱导TNF-α表达和细胞氧化应激的作用和机制.方法 1)rVVC经多粘菌素B(PMB)脱内毒素处理作用小鼠骨髓诱导巨噬细胞(BMMΦ)、脾脏和肝脏单核细胞悬液,流式细胞术分析rVVC对上述组织中巨噬细胞存活率的影响；2)流式细胞术检测rWC对BMMΦ TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和ROS产生的影响；3)免疫印迹检测rVVC对BMMΦ中p38、Erk1/2、AKT和NFKB p65等磷酸化的影响；4)Real Time-PCR检测上述细胞中TNF-α等mRNA转录水平表达情况；5)信号通路抑制剂对rVVC诱导BMMΦ ROS升高的影响；6) rVVC对TNF-α敲除小鼠BMMΦ ROS水平的影响.结果 1) rVVC作用小鼠脾脏、肝脏、骨髓诱导的巨噬细胞生存率均明显下降,呈剂量依赖效应；2)低剂量rVVC对BMMΦ无显著杀伤作用,但能诱导BMMΦ胞内ROS和TNF-α等炎症因子表达,并促进TNF-α mRNA转录；3) rVVC上调BMMΦ胞内p38和NFKB p65磷酸化水平,其诱导的ROS升高可被p38和NFKB抑制剂阻断；4)TNF-α敲除BMMΦ经rVVC刺激后,ROS水平与野生型BMMΦ比较无显著差异.结论 rVVC对小鼠原代巨噬细胞具有一定杀伤作用,低剂量rWC以致炎为主.rVVC能通过p38-MAPKs和NFKB信号的协同作用介导BMMΦ内TNF-α非依赖的ROS升高.本研究将进一步拓展VVC的分子致病机理,为进一步阐明其损伤和激活天然免疫细胞的机制提供实验依据.
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