应用多重聚合酶链反应方法特异性鉴定卡介菌多糖核酸

• 作 者: 邱阿明 赵爱华 贾淑珍 寇丽杰 乔来艳 李建蓉 王国治
• 机 构: 华中科技大学同济医学院基础医学院,武汉,430030 中国药品生物制品检定所,北京,100050
• 出 处: 第九次全国生物制品学术会议
• 发表日期: 2007年7期
• 关键词: 卡介菌多糖核酸 缺失区RD1 多重聚合酶链反应 卡介苗 PCR 生物制品

目的：建立特异性鉴定卡介菌多糖核酸的方法。
方法：目前国际上已经完成结核分枝杆菌H37Rv、牛型分枝杆菌和卡介菌巴斯德株的全基因组测序。与H37Rv毒株进行比较，BCG菌株可以得到16个长度1903-12733 bps(碱基对)不等的缺失区域(Regions of Difference)，这些区域被依次命名为RD1-RD16。这16个缺失区域中，RD1是一个很特殊的片段，它存在于所有有毒分枝杆菌中，在卡介苗最初的减毒培育中缺失，因此在所有的卡介苗菌株中均无RD1序列，通过检测RD1区的存在与否，可以特异性的鉴别BCG。
结果: 卡介菌多糖核酸注射液和国内皮内注射用BCG疫苗生产用菌株均缺失RD1区，多重PCR产物为196bp；牛分支杆菌标准株和结核分枝杆菌H37Rv存在RD1区，多重PCR产物为146bp。
结论: 应用多重PCR方法检测RD1区的存在与否，可以区别BCG和其它有毒的分枝杆菌，能特异性的鉴别BCG，适用于卡介菌多糖核酸注射液的特异性鉴别试验。