【摘 要】
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绿色荧光蛋白是一种可以在活细胞中表达的荧光蛋白,以作为报告基因广泛应用在丝状真菌的分子生物学研究中.本试验通过无缝克隆技术,将EGFP基因融合到pBARGPE1-Hygro上,构
【机 构】
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沈阳农业大学植物免疫研究所,沈阳 110866
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绿色荧光蛋白是一种可以在活细胞中表达的荧光蛋白,以作为报告基因广泛应用在丝状真菌的分子生物学研究中.本试验通过无缝克隆技术,将EGFP基因融合到pBARGPE1-Hygro上,构建真菌表达载体pBARGPE1-Hygro-EGFP.以玉米茎腐病轮枝镰孢菌菌株Fv27原生质体为受体,采用PEG介导法,将含有EGFP基因的真菌表达载体转入该菌株中,构建了轮枝镰孢菌Fv27的绿色荧光蛋白基因转化体,连续筛选5轮获得稳转株.经PCR鉴定表明,Fv27基因组中整合了EGFP基因；在荧光显微镜和体式显微镜中观察进一步证实,转基因菌株Fv27-EGFP的分生孢子及菌丝均可发出清晰的绿色荧光,为进一步研究真菌在植物体中的侵染循环提供依据.
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