【摘 要】
：
目的:构建大容量人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗c-Met特异性抗体并进行初步鉴定。方法:采集20位健康成人的骨髓淋巴细胞,用PCR扩增人Fab片断抗体基因,插入载体pComb3XSS内,构建人源天然Fab抗体库。以固相化的抗原对抗体库进行6轮筛选后,随机挑选60个克隆用Phage EIJSA、BstOI酶切片断分析进行检测,获得阳性克隆,作可溶性表达和鉴定。结果:Fab噬菌体抗体库的库容为1.
【机 构】
：
南京医科大学病理学系 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏南京 210029 南京医科大学卫
【出 处】
：
2009中国南京ERCP、EUS、ESD论坛
论文部分内容阅读
目的:构建大容量人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗c-Met特异性抗体并进行初步鉴定。方法:采集20位健康成人的骨髓淋巴细胞,用PCR扩增人Fab片断抗体基因,插入载体pComb3XSS内,构建人源天然Fab抗体库。以固相化的抗原对抗体库进行6轮筛选后,随机挑选60个克隆用Phage EIJSA、BstOI酶切片断分析进行检测,获得阳性克隆,作可溶性表达和鉴定。结果:Fab噬菌体抗体库的库容为1.2×109,并从中筛选到一株与c-Met结合的人源抗体克隆,命名为AM2-26,DNA序列分析证明为人免疫球蛋白可变区基因,Western blot证实表达出了人源抗c-Met Fab抗体片段,ELISA特异性鉴定阳性。结论:构建了大容量人源天然Fab抗体库,从中获得一株抗c-Met人源Fab抗体片段,有望为抗肿瘤药物的研制提供新的候选分子。
其他文献
随着医院规模的不断扩大及南扩工程的逐步深入，深切感受到国有资产的管理作为医院综合管理的重要组成部分，如何进行科学有效的管理，充分发挥其效能，以确保其安全性和完整性，实现保值增值，对提高医院的经济效益和社会效益的最大化，增强医院的核心竞争力是十分重要的。为此，本研究根据财务处资产办提出的资产管理工作的实际需求，在医疗原有各职能部门固定资产系统分散管理的基础上，以整合医院现行的医疗设备、房屋建筑、交通
超声学是一门应用较广的学科，随着电子技术的发展，它在医学领域中的应用日益广泛。自20世纪50年代以后，超声诊断由实验探索阶段逐步进入了临床实用阶段。超声成像的物理学基础是超声在各种不同介质中传播的物理特性。超声成像的基本方法是向人体内发射超声波，并接收和记录由体内各种不同器官，组织，界面所反射、散射或透射的超声信号，根据该信号的特点，取得信息，作出诊断。可见超声诊断的精确度超声诊断仪的精度及人员对
胰腺导管腺癌是人类最致命的恶性肿瘤之一，5年生存率约0. 4[％]一5[％]。化疗是胰腺癌术后重要的辅助治疗手段，然而多药耐药(MDR)的出现使化疗效果下降，常常使胰腺癌的治疗效果不理想，因此对胰腺癌多药耐药基因的研究逐渐受到重视。本实验通过体外诱导胰腺癌细胞株Patu8988对培美曲塞获得性耐药，分别检测正常胰腺癌细胞株和耐药株中相关基因表达的差异，为提高胰腺癌的化疗疗效提供理论指导。
胰十二指肠切除胰肠吻合术后，胰漏是一种常见而严重的并发症。发生率6[％]-24[％]，相关死亡率达40[％]。为防止胰漏的发生，不断有学者对胰肠吻合方式方法作出改进，但胰漏仍时有发生。其发生的主要原因为胰腺质地柔软脆弱且有分必胰液功能，吻合时极易发生组织切割损伤，吻合不可靠，吻合后胰液对吻合口的腐蚀使之破溃发生胰漏。基于此，本文介绍了某院收治的21例胰腺肿瘤患者的临床资料，探讨了胰漏发生的主要原因
区域性门脉高压症又称为左侧门脉高压、局限性门脉高压等，是引起上消化道出血的罕见原因，也是唯一可以治愈的门脉高压症。本文回顾性分析了收治12例胰源性门脉高压患者的临床资料，探讨了该病的病因及发病机理，论述了胰源性区域性门脉高压症并上消化道出血的诊断与治疗。
本文回顾性分析某院在1969年1月至2008年12月期间收治的38例PETS患者的基本资料，总结出了，胰腺恶性内分泌肿瘤的诊治中有以下特点:(1)除功能性PETs外，影像学是主要的定位和定性诊断手段，PETs具有高血供等特征，如存在转移、浸润、局部侵犯等恶性表现，考虑恶性可能；功能性PETS定性诊断依赖于激素水平测定；(2)恶性率较高(胰岛素瘤除外)，但恶性度较低；(3)手术切除是最重要的治疗方法
目的:探讨胆管壁病变的经胆道镜微波治疗方法。方法:在胆道镜直视下对胆管壁病变(包括胆管狭窄及胆管息肉、胆管息肉样病变、胆管壁肿瘤)进行治疗:①对胆管狭窄采用微波功率50～90w,多点多次放射状凝灼、切开,使膜样增生的组织炭化或汽化,狭窄口扩大;②胆管息肉、胆管息肉样病变及胆管肿瘤先取活检,采用功率90～110w,直视下将辐射头插入病变实质内,使病变局部发白炭化。结果:①狭窄胆管微波治疗32例次36
目的:构建绿脓杆菌外毒素PE38KDEL融合全人源抗c-Met单链抗体原核表达载体,并对其产物进行变性、复性和纯化,检测其对肝癌细胞系的毒性作用。方法:以从人源天然Fab抗体库中筛选出的AM2-26克隆作为模板扩增出人源c-Met单链基因,采用基因工程原理,将扩增出的c-Met单链基因和PE38KDEL,基因克隆入pBAD/GIlIA表达载体中,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确
目的:从大容量人源Fab抗体库中筛选全人源抗c-Met抗体,并对抗体与肝癌细胞的结合活性进行初步鉴定。方法:利用Met-Fc对大容量人源Fab抗体库进行固相筛选,经过5轮固相筛选,随机挑选30个克隆经ELISA差减鉴定,阳性克隆进行可溶性表达;用c-Met表达阳性的人肝癌细胞株鉴定抗c-Met抗体Fab的结合活性。结果:Western blotting、免疫荧光结果显示,c-Met分子表达于SMM
目的:构建绿脓杆菌外毒素PE38KDEL融合全人源抗c-Met单链抗体原核表达载体,并对其产物进行变性、复性和纯化,检测其对肝癌细胞系的毒性作用。方法:以从人源天然Fab抗体库中筛选出的AM2-26克隆作为模板扩增出人源c-Met单链基因,采用基因工程原理,将扩增出的c-Met单链基因和PE38KDEL基因克隆入pBAD/GIIIA表达载体中,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确;