【摘 要】
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目的:为筛选弓形虫分泌毒性因子-棒状体蛋白2(ROP2)在终末宿主细胞内的互作因子,构建ROP2的酵母双杂交诱饵表达载体,并检测其表达蛋白对酵母菌生长的毒性作用及自激活活性.
【机 构】
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山东省医学科学院,山东省寄生虫病防治研究所,山东济宁272033
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目的:为筛选弓形虫分泌毒性因子-棒状体蛋白2(ROP2)在终末宿主细胞内的互作因子,构建ROP2的酵母双杂交诱饵表达载体,并检测其表达蛋白对酵母菌生长的毒性作用及自激活活性.
方法:根据ROP2蛋白的特性选取1～561氨基酸、25 ～ 241氨基酸、242～561氨基酸作为目的片段,PCR扩增弓形虫基因组获得3片段,定向克隆到酵母表达载体pGBKT 7上,经测序正确后,将其转化到酵母菌Y 187感受态细胞,在缺陷性培养基上观察3个诱饵表达载体在Y 187中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和自激活功能.
结果:成功扩增出ROP2基因的3个目的片段,并将其克隆到诱饵表达载体pGBKT7中,经测序及酶切鉴定结果正确,转化到酵母Y187细胞中的诱饵表达载体无毒性和自激活作用.
结论:成功获得了对宿主酵母细胞无毒性且未自主激活活性的诱饵表达载体pG-BKT7-ROP21-561、pGBKT7-ROP2242-561、pGBKT7-ROP225-241,可作为酵母双杂合系统中的"诱饵",为下一步利用酵母双杂交系统筛选ROP2在终末宿主细胞内的相互作用蛋白创造了条件.
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