【摘 要】
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松材线虫病是松树的一种毁灭性病害,目前我国已有15个省(区、市)的193个县(市、区)发生松材线虫疫情,致死松树5亿多株,毁灭松林500多万亩,经济损失数千亿元,松材线虫病已
【机 构】
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中国农业大学植物病理系,北京100193
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松材线虫病是松树的一种毁灭性病害,目前我国已有15个省(区、市)的193个县(市、区)发生松材线虫疫情,致死松树5亿多株,毁灭松林500多万亩,经济损失数千亿元,松材线虫病已成为绿色松林资源的一大"杀手"。该病涉及寄主、线虫、天牛、真菌、细菌以及环境因素等多个方面,其致病机理研究至今未能有明确阐述。自Oku (1980)首次提出细菌在松材线虫病中的致病作用以来,很多学者证明了感病松树的萎蔫与松材线虫体表携带的细菌有关,国内亦有人把该病看作是线虫和细菌共同侵染引起的复合侵染病害(谢立群等,2004；赵博光,2000；谈家金,2001)。自然条件下分离到的松材线虫携带很多细菌,许多学者研究了细菌对松材线虫的生长发育是否有影响,结论不一：有些结果表明松材线虫携带的细菌促进松材线虫生长繁殖,也有些表明对线虫繁殖无影响。不管是研究细菌对松材线虫生长发育的影响还是研究细菌是否和松材线虫一起引起感病松材的萎蔫,都首先需要获得无菌松材线虫,因此我们采用硫酸链霉素和放线菌酮及硫柳汞混用的消毒制剂对松材线虫虫卵消毒。将获得的消毒虫卵放置在长满灰葡萄孢的PDA斜面上培养,同时将部分消毒虫卵放置在NA培养基上,观察消毒效果。待斜面上的线虫孵化繁殖后,挑取少量线虫在无菌条件下研磨,以线虫匀浆为模板,通过细菌通用引物扩增,检测线虫带菌情况。据此,我们获得了无菌松材线虫。同时对无菌松材线虫和带菌线虫的繁殖力进行了比较,发现细菌抑制了线虫繁殖,多次重复实验所得结论一致。
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