【摘 要】
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本研究采用非均一化的Oliga-dT引物定向克隆技术,构建了南移刺参织的cDNA文库.对提取的刺参总RNA用紫外分光光度计进行检测,发现OD260/OD280和OD260/OD230的比值均＞1.9.用
【机 构】
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宁波大学生命科学与生物工程学院,宁波315211
【出 处】
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中国水产学会海参学术研究与产业发展论坛
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本研究采用非均一化的Oliga-dT引物定向克隆技术,构建了南移刺参织的cDNA文库.对提取的刺参总RNA用紫外分光光度计进行检测,发现OD260/OD280和OD260/OD230的比值均＞1.9.用1％的甲醛变形凝胶电泳检测结果显示28S、18S和5.8S三条条带均有出现,无明显拖尾,亦看不见明显的基因组和蛋白质污染,28S和18S两条带的亮度比基本上呈2∶1的关系,由此说明此RNA无降解,完整性较好.利用T4 DNA连接酶把加工好的双链cDNA连接到pBluescriptⅡSK(+)载体的EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ位点上,连接产物电转化至DH10B(电转化条件为1.5 KV,200 Ω,25 μF),得到原始文库.取1μl原始文库,用LB培养基进行10-1-10-3稀释后,涂布于含30μg/ml氯霉素的LB平板上,进行文库滴度测定.
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