【摘 要】
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目的：检测鸡胚成纤维细胞(CEF)感染新城疫病毒(NDV)后,其TOLL样受体7(chTLR7)基因表达动态变化,为研究chTLR7在抗病毒过程中发挥的作用及生物学意义提供科学的实验依据. 材
【机 构】
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东北农业大学 动物医学院,黑龙江哈尔滨150030
【出 处】
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2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会
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目的：检测鸡胚成纤维细胞(CEF)感染新城疫病毒(NDV)后,其TOLL样受体7(chTLR7)基因表达动态变化,为研究chTLR7在抗病毒过程中发挥的作用及生物学意义提供科学的实验依据.
材料方法：将培养至单层的CEF分为两组,即对照组(C组)和NDV感染组(I组).其中，I组CEF用IOOTCID50NDV进行感染。采用Trizol法分别提取感染NDV后的12h、24h、36h和48hCEF总RNA，及其相应的对照组CEF总RNA，反转录合成cDNA，进行实时荧光定量PCR检测。采用SPSS16.0软件对试验数据进行处理。
结果：PCR结果显示，在大小为229bp处获得与预计大小相一致、条带单一的chTLR7片段。chTLR7与chβ-actin扩增产物单一，熔解曲线与标准品熔解曲线相符，熔解曲线只有一个峰值，均为特异性扩增。采用2-△△ACt法分析实时荧光定量PCR结果，发现CEF感染NDV后12h，其chTLR7 mRNA表达量明显高于对照组(p<0.0l)，24h时又显著低于对照组(p<0.01)，以后逐渐升高，于36h和48h均明显高于对照组(p<0.01)。
结论：本试验采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法，对感染NDV后的CEF chTLR7 mRNA动态表达情况进行了研究，结果发现，chTLR7 mRNA表达量在感染后的各个时间点均较对照组差异极显著(p<0.01)，但却呈现波动变化，24h检测到的chTLR7mRNA表达量较12h表达量降低，36h又逐渐上升，这可能与病毒的复制、chTLR7表达的负调控有关，但具体机制还需进一步的试验证实。本研究提示chTLR7可能参与了NDV感染早期的抗原识别和天然免疫反应。
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