【摘 要】
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目的 以非小细胞肺癌A549细胞和动物肿瘤异位移植模型为研究对象,观察不同照射方式和顺铂联合治疗下细胞自噬和凋亡的发生和发展,并探讨其机制.方法 实验分别为假照组；超
【机 构】
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吉林大学公共卫生学院 卫生部放射生物学重点实验室,吉林 长春 130021
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目的 以非小细胞肺癌A549细胞和动物肿瘤异位移植模型为研究对象,观察不同照射方式和顺铂联合治疗下细胞自噬和凋亡的发生和发展,并探讨其机制.方法 实验分别为假照组；超分割组(1Gy/次,2次/1天,连续5天)；常规分割组(2Gy/次,1次/1天,连续5天)；常规分割+顺铂组；10Gy单次照射组.采用集落形成实验和CCK8试剂盒检测A549细胞在不同处理条件下长期和短期生存率变化情况,用流式细胞术检测细胞凋亡率,MDC染色及GFP-LC3转染细胞检测自噬.WESTERN BLOT方法检测自噬和凋亡相关基因的蛋白表达情况.将Lewis肺癌细胞移植到C57BL/6雄性小鼠右后肢建立体外异位移植瘤模型,用免疫组化方法检测组织切片中蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,超分割,常规分割,常规分割+顺铂,10Gy单次照射组集落形成能力明显降低,分别为对照的28％,11.4％,0.84％和0.4％；细胞凋亡发生率增加,分别为4.6％,6.2％,20.1％,22.7％,19.6％,照射前加入3MA(自噬特异性抑制剂)、Z-VAD-FMK(凋亡抑制剂)使凋亡发生率均明显降低.自噬发生率分别为11.46％,70.83％,78％,88.57％,28.07％,加入3MA和Z-VAD-FMK后,自噬发生率明显降低.肿瘤组织经染色后显示,MAP-LC3、beclin、dapk1、bax、p21、mdm2、H2ax表达升高,而p-AKT、bcl-2蛋白表达下降.结论不同分割剂量放疗方案及顺铂联合用药对非小细胞肺癌细胞死亡的影响可能涉及自噬和凋亡的共同通路.
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