【摘 要】
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目的:通过对重组腺病毒、重组腺相关病毒的质量研究和实验方法参数的选择,建立了重组腺病毒人白细胞介素2(Adv/hIL2)和重组腺相关病毒2型/人凝血因子Ⅸ的质量控制标准(AAV-2/hFIX).方法:采用离子交换色谱法对病毒颗粒纯度进行测定;以CPE法测定腺病毒滴度,结合颗粒数的测定,以比滴度来综合控制腺病毒制品的质量,以斑点杂交法测定重组腺相关病毒颗粒数;以PCR法和基因组酶切图谱法鉴定腺病毒、
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目的:通过对重组腺病毒、重组腺相关病毒的质量研究和实验方法参数的选择,建立了重组腺病毒人白细胞介素2(Adv/hIL2)和重组腺相关病毒2型/人凝血因子Ⅸ的质量控制标准(AAV-2/hFIX).方法:采用离子交换色谱法对病毒颗粒纯度进行测定;以CPE法测定腺病毒滴度,结合颗粒数的测定,以比滴度来综合控制腺病毒制品的质量,以斑点杂交法测定重组腺相关病毒颗粒数;以PCR法和基因组酶切图谱法鉴定腺病毒、重组腺相关病毒基因组;以MTT法和ELISA法测定IL-2的活性和表达量,以一期法于Ⅸ因子基因剔除小鼠体内测定AAV-2/hFIX生物学活性,并通过ELISA法测定感染BHK-21细胞后hFIX的表达量.结果:病毒载体纯度均大于98﹪,重组腺病毒比滴度大于0.01pfu/vp,重组腺相关病毒颗粒数大于1.0×1012V.G/ml,病毒载体的重组基因结构与预期相同;重组腺病毒IL-2表达活性达700U/ml,表达量为25ng/ml,Ⅸ因子剔除小鼠肌肉注射病毒后21d,小鼠血液中人凝血因子Ⅸ活性达到大于正常人因子Ⅸ活性的15﹪,Ⅸ因子的体外表达水平大于20.0ng/ml.其他各项检测指标均符合规定.结论:本研究建立了重组腺病毒人白细胞介素2(Adv/hIL2)和重组腺相关病毒2型/人凝血因子Ⅸ(AAV-2/hFIX)的质量控制标准.
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