构建人源抗体库并亲和性筛选抗大肠癌单链抗体

• 作 者: 胡志伟 朱建高 周国华 陈世民 胡锦跃 段招军
• 机 构: 湖南医科大学肿瘤研究所免疫生物室; 湖南医科大学微生物教研室病毒研究室
• 发表日期: 1998年期

<正>目的以体外致敏法和噬菌体呈现技术将我室制备的有临床应用前景的抗大肠癌单抗Hb3 人源化和小型化。方法以噬菌体呈现技术构建人源全套抗体库,用亲和性筛选人源抗大肠癌单链抗体。结果分别用CaCl₂法和电穿孔法将带有全套单链抗体（scFv）基因的fUSE5表达载体转化 E.coli K802和MC1061菌株,得到库容分别为10⁴和10⁶的两个初级抗体库。scFv在CaCl₂文库中的插入百分率为70％,而电穿孔文库则为100％。用逐渐减少CA—Hb₃抗原量的亲和性筛选三次后,两个文库分别为7.5×10⁶和6×10⁸。从CaCl₂文库随机挑取的40个克隆和电穿孔文库的50 个克隆均与CA—Hb₃有不同程度的结合。其中最好的克隆为EL6D和Ca12。这两个克隆与其亲本抗体Hb3具有相同的特异性和结合特性。结论我们采用的联合体外致敏法、噬菌体呈现技术和亲和性筛选的策略成功地将鼠源单抗Hb3人源化。这个策略可能推广至其它有临床价值的鼠源单抗实现人源化,有重要的应用价值。