【摘 要】
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神经细胞原代培养是研究神经细胞形态及功能的重要手段之一,随着对神经发育和神经细胞分化研究的深入,在单一神经细胞培养基础上进行的实验研究越来越多,因此,对于原代培
【机 构】
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山西医科大学医学实验中心分子生物学实验室,太原030001
【出 处】
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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议(The 7th Biennial Meeting and the
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神经细胞原代培养是研究神经细胞形态及功能的重要手段之一,随着对神经发育和神经细胞分化研究的深入,在单一神经细胞培养基础上进行的实验研究越来越多,因此,对于原代培养神经细胞的纯度要求也越来越高.本实验通过对两种常用的运动神经元培养方法进行比较,来探讨脊髓运动神经元的分离、纯化及体外培养的途径.两种方法中运动神经元均取自生后1d乳鼠,在体视显微镜下分离脊髓腹侧,切成1 mm3大小,并用0.025％胰蛋白酶37℃消化15 min,然后加入胎牛血清终止反应,1500 r/min离心10 min,弃上清,所得细胞沉淀用两种方法进行运动神经元的纯化培养.方法 1.所得的细胞沉淀通过抗体洗淘分离脊髓前角运动神经元：选用LNGFR的单克隆抗体192-IgG作为洗淘此期大鼠运动神经元的抗体.将浓度为1μg/mL的羊抗鼠IgG二抗溶液加到聚苯乙烯培养皿内,4℃下放置2h,以包被培养皿.用PBS漂洗去未吸附的二抗后,用含192-IgG的PBS孵育培养皿1h,洗去未结合的192-IgG.将上面所得的脊髓细胞悬液加到培养皿内,室温孵育1h,用PBS轻缓漂洗培养皿8次.加入高浓度的192-IgG洗脱培养皿内保留的细胞.收集细胞悬液,300 g离心10min后接种.方法2.将所得的细胞沉淀直接用于细胞培养,培养24 h后加入阿糖胞苷抑制胶质细胞的生长,作用24 h后去除抑制剂.采用免疫荧光技术检测两种方法所获得的细胞培养物中ChAT阳性细胞所占的百分比.
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