论文部分内容阅读
核酸适配体常被用做识别生物标志物的分子探针,此前,已发展了一种基于适配体的"fishing"方法来识别疾病细胞的生物标志物.然而,由于适配体和靶分子间弱的非共价作用,这一方法的应用受到限制.光亲和标记技术由于可以将蛋白与DNA、小分子和其他蛋白共价连接.利用光亲和标记技术研究了适配体与组蛋白的相互作用.本文结合核酸适配体的识别和灵活的光交联共价模式，构建了一种双链核酸适配体探针用于对溶菌酶的标记和富集，其中BP(bindingprobe)包含两部分：一段为未修饰的溶菌酶适配体和一段单链DNA。CP(capture probe)包括一段互补的DNA序列、一个光交联剂和一个荧光标签(FAM)或生物素标签。整个流程分为五步：1、Aptamer-BP先与目标蛋白(LYS)作用识别；2、加入CP，通过DNA自组装，让光交联剂足够靠近目标蛋白；3、在紫外下引发交联；4、捕获的蛋白可通过荧光标签或生物素检测或富集；5、目标蛋白通过质谱鉴定指认。由于适配子结合探针附近没有化学官能团干扰，能够保证适配体与溶菌酶的亲和识别，而随着DNA自组装，光交联基团快速引入和激发，将溶菌酶共价键合到探针上，可以提高富集效果。通过优化探针和分析条件，实现了探针在复杂背景中对溶菌酶的高灵敏、高选择标记和富集。