【摘 要】
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目的近来对γδT细胞的功能研究主要是利用γδT细胞的清除及缺陷的模型,对肠粘膜γδT细胞的纯化及体内外作用研究甚少。本研究旨在建立小鼠小肠上皮内γδT细胞的纯化方法,
【机 构】
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浙江大学医学院附属第一医院消化内科;
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目的近来对γδT细胞的功能研究主要是利用γδT细胞的清除及缺陷的模型,对肠粘膜γδT细胞的纯化及体内外作用研究甚少。本研究旨在建立小鼠小肠上皮内γδT细胞的纯化方法,为体内外实验奠定基础。方法将BALB/c小鼠的小肠外翻,机械振荡及化学作用离散上皮,用Percoll密度梯度离心提纯淋巴细胞。流式细胞术检测细胞亚群百分比。用磁性活化细胞分选技术(magnetic activated cell sorting,MACS)分选γδT细胞,流式细胞术检测纯度。小肠上皮内淋巴细胞及分选的细胞经包被的抗CD3ε抗体刺激,体外培养48小时,ELISA法检测上清中IFN-γ及TGF-β1的浓度。结果本文建立的提取小肠上皮内淋巴细胞的方法耗时较少,纯度及产量高。将细胞用40%-70%不连续Percoll梯度单次离心及先用30%Percoll离心再用40%-70%Percoll二步法离心,细胞亚群的百分比未见差异。单步法提纯少费力,足以能够进行细胞亚群的表型分析,但二步法提纯的细胞因纯度稍高,更适合于分选γδT细胞。将上皮内淋巴细胞用荧光标记的抗TCRγδ抗体标记,然后用抗荧光微珠标记,对抗体及微珠进行滴度,优化分选,使细胞纯度达95%以上。经包被的抗CD3ε抗体刺激后,小肠上皮内淋巴细胞比γδT细胞产生更多的IFN-γ及TGF-β1,γδT细胞分泌极少量的IFN-γ。结论肠粘膜γδT细胞的纯化有助于研究其表型及功能。
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