新型温敏聚合物纳米金酶反应器的制备及其蛋白酶解研究

来源 :第十届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yy349764474
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本文采用RAFT聚合方法合成制备了结构可控并具温敏响应性质的聚合物-聚异丙基丙烯酰胺(PNIPAM),然后在室温下与氯金酸反应,制备了单分散性良好的温敏纳米金(GNPs);为进一步证明合成方法的普适性,还同时合成了其它两种聚丙烯酰胺衍生物,并采用同样的方法制备了聚合物保护的纳米金。进一步考察了PNIPAM-GNPs的制备条件(如:聚合物的分子量、聚合物的浓度及聚合反应时间对制备PNIPAM-GNPs的影响),并通过DLS及透过率的考察,研究了其温敏性质;还考察了不同pH及盐浓度条件下PNIPAM-GNPs的稳定性。研究结果表明:聚丙烯酰胺衍生物采用此方法均可得到分散性良好的聚合物-GNPs,而且,其中的PNIPAM-GNPs还具有良好的温敏性质。因所合成制备的PNIPAM-GNPs在温度高于PNIPAM的LCST时,聚合物链会卷曲形成疏水性的纳米孔穴,在温度低于PNIPAM的LCST时,聚合物链会伸展,利用PNIPAM的这一智能响应性质,以所合成制备的PNIPAM-GNPs作为新型纳米酶反应器,以BAEE为底物,开展了胰蛋白酶酶反应动力学研究,发现:相较于自由溶液中胰蛋白酶的酶解效率,此新型聚合物纳米酶反应器可提高酶解效率385倍。本文认为:在37℃时,因PNIPAM卷曲所形成的纳米孔穴是实现高效酶解反应的主因,这可解释为:在自由溶液酶解过程中,取决于物质扩散速度的底物-酶碰撞的酶解过程较费时,而使用PNIPAM-GNPs作为酶反应器时,胰蛋白酶在PNIPAM的卷曲过程中会被包裹于聚合物链所形成的疏水性纳米孔内,由此增加了底物与酶的碰撞几率,并进而极大地提高了酶解反应速率和酶解效率。
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