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目的:制备唑来膦酸阳离子脂质体(Zoledronic acid Cationic Liposomes,ZOL-CL),通过考察其理化性质和体外释药特性,并研究其体外抗肿瘤作用和在荷瘤小鼠体内的抗肿瘤作用,证明ZOL-CL的靶向、抑瘤作用.
方法:以二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、3β-[N-(N,N-二甲氨基乙基)]氨甲酰基-胆固醇(DC-Chol)为载体材料,采用薄膜分散法(film dispersion method)制备ZOL-CL.在对DPPC与DC-Chol的质量比、氯仿体积、旋转蒸发时间、PBS体积、探头超声时间等单因素考察的基础上优化处方工艺.继以透射电子显微镜观察ZOL-CL的外观形态,粒度测定仪测定平均粒径、PDI和Zeta电位,高速离心法结合HPLC测定包封率、载药量,透析袋法考察体外释药特性.通过SRB法考察ZOL-CL对肿瘤细胞的增殖抑制作用,评价其体外抗肿瘤作用.通过考察ZOL-CL对荷瘤小鼠的肿瘤抑制效果,对肿瘤组织进行免疫组化研究,测定内源性血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白的表达,评价其体内抗肿瘤作用.
结果:制备所得ZOL-CL外观呈圆形，平均粒径为(106.8±1.94)nm,PDI为(0.262±0.027),Zeta电位为(42.37±2.60)mV;包封率为(38.54±0.99)％，载药量为(3.42±0.27);在pH 10.0的NaOH溶液中的体外释药具有缓释靶向特性，药物释放曲线符合Weibull方程模型(lnln(1/1-Q)=0.4472lnt-1.3514, r=0.9863)。体外杭肿瘤实验中，ZOL组、ZOL-Lipo组、ZOL-CL组对A549细胞抑制作用的ICs。分别是(184.6±12.31)μg·mL-1,(66.92±3.75)μg·mL-1,(6.38±1.66μg·mL-1，且由PBS对照组、ZOL组、ZOL-Lipo组、ZOL-CL组对A549的细胞生长曲线图和细胞形态图可见，ZOL-CL组较ZOL-Lipo组、ZOL组可显著抑制A549细胞的增殖作用。体内抗肿瘤实验中，生理盐水组的平均瘤重为(1.73±0.57)g,ZOL组的平均瘤重为(1.69±0.69)g,ZOL-Lipo组的平均瘤重为(1.09±0.37)g,ZOL-CL组的平均瘤重为(0.90±0.38)g.与对照组相比，ZOL组的肿瘤抑制率为2.10％,ZOL-Lipo组的肿瘤抑制率为36.66％，ZOL-CL组的肿瘤抑制率为48.18％0取肿瘤组织进行免疫组织化学研究，测定VEGF蛋白和COX-2蛋白的表达，结果该两种蛋白在A549肺癌移植瘤的生理盐水对照组表达呈强阳性，在ZOL组中呈中等阳性表达，在ZOL-Lip。组中呈弱阳性表达，在ZOL-CL组中表达稍微弱。
结论:理化性质和体外释放的实验结果表明成功制备了ZOL-CL;与PBS对照组相比，ZOL、ZOL-Lipo、ZOL-CL均可抑制A549肿瘤细胞的增殖，且ZOL-CL对细胞增殖抑制作用最强;体内抗肿瘤实验提示，ZOL-CL经荷瘤小鼠尾静脉给药后，可通过下调肿瘤组织中VEGF蛋白和COX-2蛋白的表达，显著抑制肿瘤的血管生成，从而达到抑制肿瘤增殖的作用。本实验结果表明，唑来膦酸阳离子脂质体具有靶向、抑瘤作用。