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目的:跨膜转运蛋白P-gp是一种ATP依赖的药物外排泵,它在血脑屏障上起着重要作用,能够限制很多底物进入中枢神经系统。本实验将考察中枢兴奋药物马钱了碱和P-gp的体外亲和力,推测马钱子碱在体内的P-gp底物特性,以判断马钱子碱是否可能受血脑屏障上P-gp转运。
方法:采用ATPase活性分析方法,利用P-gp经底物诱导而产生ATPase活性,将ATP水解成ADP同时释放无机磷P1的特性,通过测定反应体系中P1的浓度来考察药物和P-gp的体外亲和力。实验采用维拉帕米作为阳性对照。实验数据用Michaelis—Menten方程进行处理,计算动力学参数。
结果:马钱了碱和维拉帕米的米曼氏常数Vmax/Km分别为1.6 min-1×103和2.9 min-1×103。
结论:马钱子碱与P-gp的体外亲和力虽然没有维拉帕米强,但是也显示了中等强度的P-gp底物特性。由此推测,P-gp可能在一定程度上影响脑组织对马钱子碱的摄取。此结论需通过体外细胞模型的转运实验以及体内实验进一步证实。