【摘 要】
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目的 建立同时测定家兔血浆和红细胞(RBC)中磷酸肌酸(PCr)及其代谢物肌酸(Cr)以及相关三磷酸腺苷(ATP)浓度的离子对反相高效液相色谱法(IP-RPHPLC),为外源性PCr在家兔体
【机 构】
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大连医科大学药学院,大连 116044
【出 处】
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第十届全国药物和化学异物代谢学术会议暨第三届国际ISSX/CSSX联合学术会议
论文部分内容阅读
目的 建立同时测定家兔血浆和红细胞(RBC)中磷酸肌酸(PCr)及其代谢物肌酸(Cr)以及相关三磷酸腺苷(ATP)浓度的离子对反相高效液相色谱法(IP-RPHPLC),为外源性PCr在家兔体内药代动力学(PK)研究提供生物分析方法学.方法 血浆以及RBC样品以6％ PCA沉淀蛋白；采用Kromasil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)；流动相由0.2％KH2PO4+0.08％四丁基硫酸氢铵缓冲液(pH=3.0)(A)、0.2％ KH2PO4+0.08％四丁基硫酸氢铵缓冲液(pH=7.5)(B)和甲醇(C)组成；梯度洗脱,(min,A/B/C)： (0,100/0/0；8,100/0/0.10,0/82/18；20,0/75/25；34,100/0/0)；同时变流速(0.8～1.3 mL/min)和检测波长(PCr、 Cr210nm,ATP、TMP 260 nm).选用甲氧苄啶为内标,以峰面积内标法定量,基线扣除法计算外源性PCr、Cr和相关ATP. 结果 血浆及RBC中PCr、Cr、ATP及TMP达基线分离,不受基质干扰,tr值分别为5.8、3.4、27.2和17.8 min.PCr在10～7500 μg/mL(血浆)、5～2500 μg/mL (RBC),Cr和ATP在10～1500 μg/mL(血浆)、5～750 μg/mL (RBC)范围内线性关系良好(r＞0.999)；三种分析物QC样品的日内精密度(RSD)≤7.30％(血浆)和≤7.40％(RBC),日间RSD分别≤9.70％(血浆)和≤7.89％ (RBC).准确度在96.47～102.39％(血浆)和90.10～109.69％(RBC)：回收率均＞90％.家兔10只,随机均分2组,分别iv PCr 500 mg/kg和250 mg/kg,不同时间收集血样和RBC样品,按上述方法测定,结果满意. 结论 本研究建立的IP-RPHPLC法准确度和精密度高,专属性强,实际应用表明该方法完全符合PCr PK生物分析方法学要求.
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