【摘 要】
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利用电转染方法将人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体电转染山羊乳腺上皮细胞,经G418和PCR筛选获得刚性克隆细胞株,经诱导的细胞株上清液用Western-blot方法检测.以转基因阳性细胞
【机 构】
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扬州大学兽医学院/江苏省转基因动物制药工程研究中心,江苏 扬州 225009
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利用电转染方法将人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体电转染山羊乳腺上皮细胞,经G418和PCR筛选获得刚性克隆细胞株,经诱导的细胞株上清液用Western-blot方法检测.以转基因阳性细胞株为核供体细胞,进行山羊体细胞核移植.结果表明:(i)部分细胞株表达重组人乳铁蛋白,分子质量为75 KDa;(ii)将144枚重构胚移入16只同步发情的山羊输卵管中,在移植后的30、60和90天的妊娠率分别为87.5％、81.3％和62.5％;(iii)3只受体产下3只克隆羊,克隆效率为2.1％,PCR-RFLP分析表明克隆羊均来自供体羊细胞,但没有整合外源基因.结果显示:转基因乳腺上皮细胞能分泌重组蛋白;乳腺上皮细胞经转染、筛选和长期培养的条件下,能保持发育的全能性,为转基因体细胞核移植技术提供另一种细胞选择.
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