【摘 要】
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目的：通过克隆、表达旋毛虫钙网蛋白(Ts-CRT),研究Ts-CRT对C1q介导的细胞溶解及虫体杀伤作用,进一步探讨虫体逃避宿主免疫攻击的机制,为旋毛虫病的防治提供一定的理论基础
【机 构】
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首都医科大学基础医学院,北京市,100069
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目的：通过克隆、表达旋毛虫钙网蛋白(Ts-CRT),研究Ts-CRT对C1q介导的细胞溶解及虫体杀伤作用,进一步探讨虫体逃避宿主免疫攻击的机制,为旋毛虫病的防治提供一定的理论基础.方法：提取旋毛虫成虫总RNA,逆转录生成cDNA,以此为模板扩增目的基因,将扩增得到的目的基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,进行高效表达；通过ELISA、Western blot等技术检测TsCRT与人补体组分C1q的结合；其次,通过ELISA检测Ts-CRT对补体经典途径活化的影响,包括检测对C1活化及C4/C3沉积情况的影响；接着,应用红细胞溶血试验,检测Ts-CRT对补体介导细胞溶解的影响.结果：通过PCR扩增得到大小为1192bp的CRT编码基因,成功将其克隆入pET-28a(+),经IPTG诱导的重组CRT(rTs-CRT)在原核表达体系内能够可溶性表达,分子量约为50kDa(含载体携带的组氨酸标签),与理论值相符.经镍柱亲和层析纯化后,获得纯度较高的rTs-CRT.ELISA、Western blot等方法证实rTs-CRT可与补体组分C1q结合；rTs-CRT通过与C1q结合可抑制C1活化、C4/C3的沉积及补体经典途径介导的绵羊红细胞溶解.结论：本研究成功地扩增、克隆并表达了Ts-CRT,并证实其通过与补体组分C1q相互作用而抑制补体活化,从而揭示了其在虫体免疫逃避中的潜在作用.
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