【摘 要】
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为构建既具有凝集性又具有抗原性的双功能融合蛋白,本研究利用特异性引物从重组质粒PMD-2E8SCFv和PMD-gE中PCR扩增得2E8基因(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和kgE基因(PRVgE主
【机 构】
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广西大学动物科学技术学院 南宁广西 530005 广西兽医研究所,南宁 广西,530001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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为构建既具有凝集性又具有抗原性的双功能融合蛋白,本研究利用特异性引物从重组质粒PMD-2E8SCFv和PMD-gE中PCR扩增得2E8基因(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和kgE基因(PRVgE主要抗原编码区),采用重叠延伸(SOE)PCR法拼接成融合的双功能分子2E8kgE,经BamHI和EcoRI双酶切处理,纯化后,克隆至BamHI和EcoRI双酶切处理的表达载体pET-Trx中,构建了原核表达载体pET-Trx-2E8kgE：将pET-Trx-2E8kgE转化至BL2lplyss中,在IPTG的诱导下表达具有双功能的融合蛋白,经过SDS-PAGE和Western-blot检测;结果表明,重组菌BL2lplyss表达出约60.1kDa的目的蛋白,与猪伪狂犬标准阳性血清发生特异性反应。红细胞凝集试验证实：2E8kgE融合蛋白既能够与人红细胞结合,又能够与PRV抗体反应,具有双功能特性。
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