【摘 要】
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将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR I 位点，将LacZ报告基因插入Sma I位点，然后切取含外源基因和报告基因的Not I片段克隆于pSY681的Not I位点，构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体，经酶切分析和PCR鉴定后，利用脂质转染试剂盒在鸡胚成纤维细胞上与F-017禽痘病毒弱毒苗株进行共转染。经重组病毒
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心(哈尔滨),东北农业大 中国农业科学院哈尔滨兽医研究
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十次学术研讨会
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将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR I 位点，将LacZ报告基因插入Sma I位点，然后切取含外源基因和报告基因的Not I片段克隆于pSY681的Not I位点，构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体，经酶切分析和PCR鉴定后，利用脂质转染试剂盒在鸡胚成纤维细胞上与F-017禽痘病毒弱毒苗株进行共转染。经重组病毒 筛选与纯化，获得遗传性状稳定的AIV HA基因重组禽痘病毒。
其他文献
对自患病鹅群分离的一株鹅副粘病毒(GPV)YG97株经经细胞凝集(HA)和红细胞凝集抑 制(HI)试验证明与NDV存在着极大的相关性。参考NDV的三个毒力指标－最小致死量鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉拉致病指数(IVPI)对YG97 株了进行了测定，表明其具有与DNV速发型相类似的毒力，属强毒力毒株。应用RT-PCR技术 对的F基因重要功能区片段扩增
以10的低致病性禽流感病毒(Lowly pathogenic awian influenza virus,LPAIV)气管内注射10日龄SPF鸡，24小时后，重复感染一次；48小时后，气管内注射禽病原性大肠杆菌353(O18)、120(018)、037(O78)、166(O78)、058(O2)、536(O88)、132(O11)和173(O26)株，3×10CFU/羽，连续观察5天。结果：LPA
通过光镜、电镜等方法对鸡马立克氏病羽髓组织进行了形态学研究。结果明显，羽髓远端坏死，羽髓中有多量肿瘤细胞浸润、肿瘤细胞弥漫性或局部性浸润。电镜观察，肿瘤细胞核异型性明显，核膜凹陷，核内出现假核内包含物。在一些羽髓中，巨噬细胞吞噬肿瘤细胞较多见，而且观察到一些肿瘤细胞发生凋亡。研究结果表明，鸡马立克氏病羽髓病变十分明显，羽髓的形态学变化可用于鸡马立克氏病的诊断。
以45000个蚀斑单位的剂量接种1日龄雏鸡，饲养观察至120日龄，解剖肉眼观察无任 何MD特异性病理变化。试制的三批疫苗分别接种1日龄雏鸡，7日龄雏鸡时用京-1株强毒攻击，饲养至60日龄。保护指数可达90-100。免疫荧光试验(IFA)对CVI988/Rispens接毒与Ⅰ型 马立克氏病病毒(MDV)gB抗原的单克隆抗体反应显示识别性荧光。对照毒株的血清型Ⅱ型SB-1、Z4和ⅢHVT无荧光反应。种
通过对国内“鸡传染性腺胃病”病原分离、鉴定、病原分离株的抗原性和血清型分析、病原分离株S1纤突基因克隆、全序列测定等多方面系统研究和分析比较，作者首次在国内提出该病是致腺胃变型为特征的鸡传染性支气管炎病毒。
将含IBVSD株S1基因的质粒PMD18-T-S1酶切，回收纯化S1基因并与pFASTBAC-THa连接 ，转化DH5a，经鉴定后制备重组SD S1 Bacmid DNA。序列测定后，转染SF9细胞，制备重组 病毒。免疫荧光检测，S1表达阳性，Western blot检测有90Kda大小的一条蛋白。
禽流感自一百多年前，在意大利发现流行以来，在许多国家都有各种亚型禽流感的暴发和流行。近几年，中国部分地区也发现了H9亚型禽流感的流行，引起鸡群生产性能的下降，损失严重。因禽流感有广泛传播、临床症状和病理变化易于与其他疫病相混淆的特点，易误诊或延误治疗，从而易造成巨大的经济损失，故应引起各界的高度重视，并应在全国范围内大力加强对H9亚型禽流感的鉴别诊断、预防和防制。
用NDLaSota弱毒株、EDS76毒株、IBD地方分离株-JD2及D78株，分别接种鸡胚、鸭胚，收集尿囊液等含毒组织，结合JD2囊组织毒，制备各种病毒抗原液，经福尔马林灭活后按一定比例混合，再加入含硒免疫增强剂，与白油佐剂乳化成油包水型三联乳剂疫苗。对三联苗各项技术指标进行了测定，证明本疫苗安全、无副作用，接种后2-3周产生免疫保护，ND和EDS76攻毒保护率为100℅。通过免疫抗体检测，该三联
该研究研制出鸡传染性鼻炎PCR试剂盒和阻断ELISA试剂盒。PCR试剂盒可直接检测病 料中的病原DNA，可测出1Pg的DNA和10～10细菌，对可疑病料的检出率是传统的细 菌分离方法的2～3倍，对常见病原菌(非Hpg)的检测结果均为阴性，可重复性好，特异性为100℅，阻断ELISA试剂盒可检测副鸡嗜血杆菌(Hpg)型特异性抗体，其种特异性为100℅，型 特异性〉99℅，且具有较好的敏感性，重复性好
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