【摘 要】
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苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是一种广泛分布于自然界的革兰氏阳性细菌,属芽胞杆菌属,蜡样芽胞杆菌族.其在形成芽胞的同时会产生由杀虫蛋白组成的伴胞晶体
【机 构】
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中国农业科学院植物保护研究所,北京,100193
【出 处】
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全国农业生物化学与分子生物学第十四届学术研讨会
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苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是一种广泛分布于自然界的革兰氏阳性细菌,属芽胞杆菌属,蜡样芽胞杆菌族.其在形成芽胞的同时会产生由杀虫蛋白组成的伴胞晶体,主要由cry和yt基因编码.Bt菌株存在着杀虫谱窄这一问题,在遗传工程菌的构建过程中,多种杀虫基因的协同表达十分重要,而对多种杀虫基因的协同表达的研究报道并不多.本实验室HD12菌株，进行了其基因组测序，比对后发现其含有8个cry基因，因此选取其作为研究材料。首先采用蔗糖梯度离心法来提取其晶体蛋白，通过SDS-PAGE和质谱对晶体蛋白进行鉴定，得知HD12晶体中含有Cry1Da,Cry1Ae,Cry1Bb,Cry1Fb,Cry1Ja这五个蛋白。利用5RACE技术确定了8个cry基因的转录起始位点，同时利用启动子融合lacZ技术，经β-半乳糖苷酶活性得知8个cry基因启动子的转录机制。其中受sigE单独调控的为cry1Da基因，受sigE,sigK共同调控的为cry1Ae,cry1Hd,cry1Bb,cry1Na,cry1Fb, cry1Ja这6个基因。启动子活性由高到低依次为P cry1Ja>Pcry1Fb>Pcry1Bb>Pcry1Ae>Pcry1Da>Pcry1Hd>Pcry1Na>Pcry2Ad。因此，选取了活性较强的cry1Ja,cry1Fb基因的启动子。拟利用这两个强启动子指导表达cry1Ac基因和cry2Ab基因，并转入同一菌株中，来验证两个启动子在同一菌株中的协同表达。
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