人Ⅲ型胶原蛋白在嗜热链球菌中的高效表达

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  胶原蛋白(collagens)是一类细胞外基质蛋白,是结缔组织的主要蛋白成份,在维护各种组织的结构完整性方面,扮演着重要的角色。胶原蛋白富含多种氨基酸、具有多种独特的结构、有着特异的组织分布、与一些器官的功能有直接的关联,更加关系到生物体的衰老。本实验通过密码子优化的方法人工设计、优化与合成了人Ⅲ型胶原蛋白α1链基因序列(col Ⅲ)。然后将片段插入线性载体pSB1C3中,构成连接质粒(pSB1C3-colⅢ)。通过双酶切的方法得到col Ⅲ片段。然后将colⅢ片段插入载体pMG36e中,构成重组质粒(pMG36e-col Ⅲ)。制备嗜热链球菌感受态,并通过电击的方法将质粒导入嗜热链球菌感受态细胞。提取所得到的工程菌进行质粒进行酶切鉴定、PCR产物测序、SDS蛋白电泳。
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