【摘 要】
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目的 观察2,5-己二酮(2,5-HD)暴露对PC12细胞凋亡的影响和探讨其毒作用机制.方法 将大鼠PC12细胞体外暴露于2,5-HD 10,20和40 mmol·L-1,暴露时间为12,24和36 h.用Hoechst33342荧光染色观察染毒后细胞核的变化；用流式细胞仪(FITC-Annexin Ⅴ/PI双染)对染毒后的凋亡百分率进行定量分析；用透射电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构；用real
【机 构】
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大连医科大学劳动卫生与环境卫生教研室,辽宁大连116044
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目的 观察2,5-己二酮(2,5-HD)暴露对PC12细胞凋亡的影响和探讨其毒作用机制.方法 将大鼠PC12细胞体外暴露于2,5-HD 10,20和40 mmol·L-1,暴露时间为12,24和36 h.用Hoechst33342荧光染色观察染毒后细胞核的变化；用流式细胞仪(FITC-Annexin Ⅴ/PI双染)对染毒后的凋亡百分率进行定量分析；用透射电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构；用real time-PCR检测Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3的mRNA表达；用Western blot分析Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3的蛋白表达.结果 ①Hoechst33342荧光染色观察：对照组细胞呈现均一亮度的蓝色荧光；而各2,5-HD暴露组出现个别PC12细胞荧光亮度较强,细胞核高度皱缩,甚至分叶的现象.②流式细胞仪检测凋亡百分率：2,5-HD暴露36 h后,与对照组(5.84％)相比,2,5-HD 10, 20和40 mmol· L-1染毒组凋亡百分率分别为9.89％,10.15％和16.42％,显著高于对照组(P＜0.05)；在2,5-HD 40 mmol· L-1染毒组,与12 h(9.49％)染毒时间相比,24和36 h2,5-HD染毒的PC12细胞凋亡百分率(10.36％和16.42％)显著增高(P＜0.05).③透射电镜观察：透射电镜观察发现,2,5-HD暴露PC12细胞出现胞体皱缩、胞浆空泡变性、染色质边缘化及细胞器解体等现象,细胞损伤程度与2,5-HD浓度和暴露时间呈正相关.④Real time-PCR分析：PC12细胞暴露2,5-HD36 h后,与对照组相比,Bcl-2的mRNA表达随着2,5-HD浓度增高而显著降低(P＜0.05),呈现剂量依赖关系；Bax的mRNA表达随着2,5-HD浓度增高而显著增高(P＜0.05),呈现剂量依赖关系；2,5-HD 20和40 mmol·L-1组PC12细胞中胱天蛋白酶3的mRNA表达显著高于对照组(P＜0.05).⑤Western blot分析：2,5-HD暴露36 h后,20和40 mmol· L-1组Bcl-2的蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05),而Bax和胱天蛋白酶3的蛋白表达显著高于对照组(P＜0.05),并呈现剂量依赖关系.在2,5-HD 40 mmol·L-1组,与12h暴露相比,24和36 h暴露的PC12细胞Bcl-2的蛋白表达显著降低(P＜0.05),而Bax和胱天蛋白酶3的蛋白表达显著增高(P＜0.05).结论 2,5-己二酮可引起大鼠PC12细胞凋亡；其机制可能是通过抑制Bcl-2/Bax的信号通路而发挥毒作用.
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