【摘 要】
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枯草芽胞杆菌广泛用于植物、动物及人类的益生菌、生物防治剂产品及工业酶类的生产、异源蛋白的表达等领域,然而其在培养过程中广泛存在着自溶现象导致其生物量的大幅降低.本
【机 构】
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武汉大学生命科学学院,武汉430072
【出 处】
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中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会
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枯草芽胞杆菌广泛用于植物、动物及人类的益生菌、生物防治剂产品及工业酶类的生产、异源蛋白的表达等领域,然而其在培养过程中广泛存在着自溶现象导致其生物量的大幅降低.本研究采用多基因失活方法,期望以此来提高其生物量抑制细胞自溶.以枯草芽胞杆菌168菌株为材料,选取了以下几个自溶相关的基因:xpf(原噬菌体PBSX中RNA聚合酶δ类似因子);skfA(原噬菌体prophage1中芽胞形成杀伤因子);lytC(营养期主要自溶酶);sdpC(芽胞形成延迟蛋白);yqxG-yqxH-CwlA(原噬菌体skin中自溶酶基因片段).利用载体pNNB194构建了一系列缺失突变体,考察了它们对生物量的影响.同时通过加入NaN3测定了突变株的自溶活性.结果表明四重缺失突变体△lytC△sdpC△skfA△sdpC抑制了细胞90％以上的自溶,生物量相对于168提高了2倍以上.用此突变株进行了β-半乳糖苷酶的胞内表达,通过酶活测定发现其胞内的β-半乳糖苷酶量同样得到了提升.突变株能有效提高生物量抑制细胞自溶提高胞内蛋白产量,在工业生产中有着重要的潜在应用价值。
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