【摘 要】
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目的：把白喉毒素A片段(diphtheria toxin A,DTA)克隆入pEGFP-N1载体,构建同时表达EGFP和DTA两个基因的重组表达载体pEGFP-N1-DTA,并在细胞水平上验证DTA片段的功能.方法：人工合
【机 构】
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华南农业大学动物科学学院 广东广州510642
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目的：把白喉毒素A片段(diphtheria toxin A,DTA)克隆入pEGFP-N1载体,构建同时表达EGFP和DTA两个基因的重组表达载体pEGFP-N1-DTA,并在细胞水平上验证DTA片段的功能.方法：人工合成白喉毒素A片段,并克隆在pUC-19载体上,获得pUC-19-DTA载体.利用PCR技术从pUC-19-DTA载体序列上扩增获得两端带特异性酶切位点的DTA基因序列,并连接到pEGFP-N1质粒上,构建了重组质粒pEGFP-N1-DTA.然后,实验组用pEGFP-N1-DTA质粒转染293T细胞,对照组用pEGFP-N1质粒转染293T细胞,并在转染后的48h观察EGFP基因的表达,同时用RT-PCR的方法检测实验组和对照组细胞中DTA的表达情况.结果：构建了pEGFP-N1-DTA，基因测序结果与预期完全相符;转染的293T细胞中，与对照组相比，而实验组的EGFP表达水平显著降低;RT-PCR结果显示，实验组细胞中有DTA基因的表达，而对照组细胞中没有检测到DTA的表达。结论：成功构建了pEGFP-N1-DTA重组表达质粒，并且发现DTA的表达能抑制GFP蛋白质的合成。
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