【摘 要】
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目的:目前,副肿瘤性天疱疮(PNP)患者肿瘤在发病中的作用不明.本文对3例PNP伴发Castlemans瘤(CD)患者肿瘤切除后肿瘤细胞进行培养,检测瘤细胞是否具有分泌自身抗体的功能,并对
【出 处】
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第四届中韩皮肤病会议、第二届中英皮肤病会议暨2004中国中西医结合皮肤性病学术会议
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目的:目前,副肿瘤性天疱疮(PNP)患者肿瘤在发病中的作用不明.本文对3例PNP伴发Castlemans瘤(CD)患者肿瘤切除后肿瘤细胞进行培养,检测瘤细胞是否具有分泌自身抗体的功能,并对培养B细胞克隆的免疫球蛋白可变区基因重排和超变区突变特点进行研究,以深入探讨肿瘤和抗体在疾病发生过程中的作用.方法:培养患者Castlemans瘤中肿瘤B细胞,免疫组化和流式细胞仪分析其表面标志;收集培养上清,以间接免疫荧光法和免疫印迹法作检测,RT-PCR扩增患者肿瘤组织中RNA,将PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及克隆,测序并分析.结果:培养肿瘤细胞多数为CD20,CD22,HLA-DR,smIgM、smIgG阳性.浓缩纯化的肿瘤B细胞培养上清液中,以间接免疫荧光法检测到抗鼠膀胱上皮细胞间IgG抗体.以人角质形成细胞蛋白提取物行免疫印迹法检测可见到分子量为190KDa的条带.从3例肿瘤培养细胞中分别克隆得到530至561bp V<,H>.基因和446至450bp V<,K>、基因.可见多组IgV<,H>.分别来源于同一胚系基因片段的现象,使用频率最高的胚系V基因片段是IGHV3-9>IGHV4-59>IGHV3-23>IGHV4-30.所有IgV<,K>与IGKV4-1<*>01胚系基因片段同源.V<,H>和V<,K>基因CDRs区的核苷酸突变均明显多于FRs区,并且在V<,H>和V<,K>基因观察到的CDRs区的替换突变数目(kR)远远大于可能发生随机突变的值,表明其来源并非自随机突变,而是抗原选择性突变.结论:3例伴发Castlemans病PNP患者的肿瘤在体外可以产生针对表皮特定抗原成分的自身抗体.功能性B细胞克隆其已重排的免疫球蛋白可变区基因CDRs超变区发生明显体细胞突变,而骨架区相对保守,可能是抗原选择的结果.这些B细胞克隆经过免疫球蛋白类别转换,可以直接产生与表皮自身抗原特特异性结合的自身反应性IgG.
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