siRNA沉默AEG-1基因对胃癌细胞生物学特性的影响及其机制的研究

来源 :第9届全国胃癌学术会议暨第二届阳光长城肿瘤学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haiwei2009
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  研究目的:AEG-1稳定沉默后对BGC-823胃癌细胞生物学特性的影响及其机制研究.研究方法:筛选出高表达AEG-1的BGC-823胃癌细胞系,将成功构建稳定沉默AEG-1基因的胃癌细胞,通过MTT法、克隆形成实验、caspase-3活性检测、Hoechst 33258荧光染色检测、划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测BGC823细胞体外生物学特性的变化.采用Western blot方法检测PI3k/Akt/mTOR信号传导通路、自噬相关因子、凋亡相关因子和转移相关因子的表达变化,建立裸鼠皮下移植瘤模型,检测了AEG-1稳定沉默后对BGC-823胃癌细胞体内生长的影响,免疫组化方法检测瘤体组织中AEG-1、VEGF、CD31蛋白表达的变化.研究结果:成功构建沉默效率最高的载体质粒建立了稳定沉默AEG-1基因的BGC823细胞系.沉默AEG-1基因后,减弱了细胞的增殖能力和克隆形成能力,促进了细胞凋亡,降低了BGC-823细胞的迁移和侵袭能力.Western-blot实验检测发现,与增殖、凋亡相关的P-Akt、p-mTOR、NF-κB蛋白的表达量降低,caspase-3蛋白的表达量增加.自噬相关蛋白P62的表达量减少,Beclin1和LC3Ⅱ型蛋白的表达量增多,并且LC3Ⅱ型与LC3Ⅰ型的比值增加,与侵袭转移相关的MMP9、MMP2,VEGF蛋白的表达量减少.裸鼠皮下移植瘤生长速度减慢,瘤重低于对照组.与对照组相比,沉默AEG-1后的BGC823细胞瘤体组织中VEGF表达显著降低,CD31标记的微血管数量减少.研究结论:沉默胃癌细胞系BGC823中的AEG-1基因,可能通过抑制PI3k/Akt/mTOR通路的活性,增强caspase-3的活性,抑制NF-κB的作用、促进细胞凋亡.增强Beclin1和LC Ⅱ的活性,减弱P62的作用,诱导细胞自噬,增加细胞死亡.抑制基质金属蛋白酶MMP9,2和血管内皮生长因子VEGF的作用降低细胞侵袭转移能力.沉默AEG-1基因能减慢BGC823细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,降低皮下移植瘤组织中AEG-1蛋白的表达,抑制移植瘤中血管的形成,减少微血管的数量.
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